[發(fā)明專(zhuān)利]一種類(lèi)肝素中硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的分離方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910449772.6
• 申請(qǐng)日: 2019-05-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110172107B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王芃
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州鴻洋醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C08B37/10
• 分類(lèi)號(hào): C08B37/10;C08B37/08
• 代理公司: 蘇州根號(hào)專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 32276
• 代理人: 項(xiàng)麗

本發(fā)明涉及一種類(lèi)肝素中硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的分離方法，它包括以下步驟：（a）將類(lèi)肝素溶于水中配成類(lèi)肝素溶液；（b）將所述類(lèi)肝素溶液經(jīng)陰離子樹(shù)脂進(jìn)行吸附；（c）采用0~1mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集各組分洗脫液；（d）將所述各組分洗脫液分別經(jīng)濃縮、加入乙醇沉淀得到硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素。這樣可以從粗品肝素到精品肝素生產(chǎn)中產(chǎn)生的副產(chǎn)物類(lèi)肝素為原料，避免了現(xiàn)有技術(shù)中有效成分的丟失，沒(méi)有引入雜質(zhì)、工藝簡(jiǎn)單、分離成本低且效果佳、容易放大。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種分離方法，具體涉及一種類(lèi)肝素中硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的分離方法。

背景技術(shù)

肝素首先從肝臟發(fā)現(xiàn)而得名，是一種從動(dòng)物中提取出來(lái)的黏多糖硫酸脂，具有抗凝、抗血栓的作用，二十世紀(jì)三十年代開(kāi)始一直被用于治療血栓。但由于肝素的動(dòng)物來(lái)源不同，會(huì)有物種病毒污染的可能性，使得使用肝素或低分子肝素時(shí)產(chǎn)生一些問(wèn)題；同時(shí)，由于動(dòng)物的養(yǎng)殖和在肝素的提取過(guò)程中的生化污染，也使得肝素的應(yīng)用受到不同程度的限制。四十多年前，以Lindahl和Choay為首的歐美一些科學(xué)家在研究肝素的抗凝、抗血栓作用時(shí)，確立了肝素的有效片段是一個(gè)含有艾杜糖酸的五糖結(jié)構(gòu)；從那時(shí)起，國(guó)際上興起了一個(gè)肝素類(lèi)似結(jié)構(gòu)的糖（即類(lèi)肝素）合成的高潮。類(lèi)肝素因此可以定義為類(lèi)似肝素的物質(zhì)，是指在化學(xué)結(jié)物上與肝素有一定程度的類(lèi)似，具有抗凝血活性的酸性；也可以指從粗品肝素到精品肝素生產(chǎn)中產(chǎn)生的副產(chǎn)物。

申請(qǐng)?zhí)枮?01510127522.2的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利公開(kāi)了一種精確定量控制肝素/類(lèi)肝素中CS（硫酸軟骨素）及DS（硫酸皮膚素）含量的方法。該方法步驟如下：（1）向含類(lèi)肝素/ 肝素的溶液中加入具有硫酸軟骨素酶B 活性的蛋白質(zhì)，待DS 含量達(dá)到預(yù)期值時(shí)，終止酶解反應(yīng)；（2）向溶液中繼續(xù)加入具有硫酸軟骨素酶AC 活性的蛋白質(zhì)，待CS 含量達(dá)到預(yù)期值時(shí)，終止酶解反應(yīng)，即得到期望CS 及DS 含量的肝素樣品或類(lèi)肝素樣品。而硫酸乙酰肝素是粗肝素經(jīng)過(guò)乙醇沉淀、陰離子交換層析后得到的一種肝素衍生物。盡管上述發(fā)明中能夠精確定量控制硫酸軟骨素和硫酸皮膚素的含量，但是無(wú)法實(shí)現(xiàn)類(lèi)肝素中硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的分離或者精確定量控制。

發(fā)明內(nèi)容

為克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明旨在提供一種類(lèi)肝素中硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的分離方法。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種類(lèi)肝素中硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的分離方法，它包括以下步驟：

（a）將類(lèi)肝素溶于水中配成類(lèi)肝素溶液；

（b）將所述類(lèi)肝素溶液經(jīng)陰離子樹(shù)脂進(jìn)行吸附；

（c）采用0~1mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集各組分洗脫液；

（d）將所述各組分洗脫液分別經(jīng)濃縮、加入乙醇沉淀得到硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素。

優(yōu)化地，步驟（a）中，所述類(lèi)肝素溶液的濃度為5~10%。

進(jìn)一步地，步驟（b）中，所述陰離子樹(shù)脂為聚丙烯酸酯類(lèi)陰離子樹(shù)脂。

進(jìn)一步地，步驟（c）中，梯度洗脫為直線梯度。

進(jìn)一步地，步驟（d）中，各組分洗脫液濃縮至氯化鈉濃度為3~4wt%。

更進(jìn)一步地，步驟（d）中，加入乙醇使混合物中乙醇的濃度為55-65 wt%。

由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明類(lèi)肝素中硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的分離方法，將主要含有硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的類(lèi)肝素溶解后上樣至陰離子交換樹(shù)脂中進(jìn)行梯度洗脫，并濃縮、沉淀而實(shí)現(xiàn)分離，這樣可以從粗品肝素到精品肝素生產(chǎn)中產(chǎn)生的副產(chǎn)物類(lèi)肝素為原料，避免了現(xiàn)有技術(shù)中有效成分的丟失，沒(méi)有引入雜質(zhì)、工藝簡(jiǎn)單、分離成本低且效果佳、容易放大。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1中硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素分離時(shí)紫外檢測(cè)器跟蹤得到的圖譜。