[發明專利]一株屎腸球菌G12的篩選及應用

在審

• 申請號: 201910446475.6
• 申請日: 2019-05-27
• 公開（公告）號: CN110408556A
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發明（設計）人: 毛晴;孫敬鋒;謝云丹;張燕玉;王軼凡
• 申請（專利權）人: 天津農學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01K61/13;A23K10/18;C12R1/01
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 劉玉珠

本發明提出一株屎腸球菌G12，它分離自貝類肝胰臟內，既安全又具有益生特性，菌株Enterococcus faecium，命名為屎腸球菌G12，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心，保藏編號為CGMCC NO.15230，保藏日期為2018年1月17日。該菌株耐熱性強，抗逆性高，益生性顯著，對常見水產致病菌維氏氣單胞菌具有較明顯抑制作用，并對大部分廣譜抗生素敏感，可耐受小腸高膽鹽環境并在腸道中定殖，適合作為飼料添加劑廣泛應用于水產養殖中，可以大大減少水產養殖中傳統抗生素的添加對環境的污染及對人類健康造成的不利影響，實現水產養殖業的可持續發展。

技術領域

本發明涉及水產用微生物添加劑技術領域，尤其涉及一種對水產常見致病菌維氏氣單胞菌具有明顯抑制作用、并且對大部分光譜抗生素敏感的屎腸球菌(Enterococcusfaecium)的分離鑒定、安全性試驗以及抗逆性能的鑒定及應用。

背景技術

屎腸球菌(Enterococcus faecium)是一類厭氧、不產孢子的革蘭氏陽性菌，菌體圓形或橢圓形，呈鏈狀排列，不產芽孢。在血平板上可形成灰白色、不透明、表面光滑、直徑為0.5-1mm的圓形菌落。根據中國農業部發布的《飼料添加劑品種目錄》中明確規定飼用微生物添加劑的種類，屎腸球菌位列其中，成為了微生態制劑常用益生菌種，對于提高幼年畜禽體增重、提高動物免疫力、調節腸道微生態平衡，減少腹瀉率、降低死亡率等方面均有顯著的效果。盡管屎腸球菌被廣泛應用，但在水產養殖領域，從水產動物自身中篩選出益生菌并應用的報道卻相對比較少。由于水產養殖中使用的很多益生菌并非從水產動物或者生活環境中篩選出來，而是來自某些陸生動物，由此造成益生菌菌株無法定殖或不穩定，只有從宿主本身篩選出的土著微生物才可以更好地適應環境，更高效的抑制病原菌。另外，還要考慮從宿主本身篩選的屎腸球菌潛在的致病性與耐藥性。如果選用的屎腸球菌具有致病性，動物食用后將對機體本身帶來危害。另一方面，細菌對抗生素的耐藥性有水平傳遞作用，很可能將耐藥性水平傳遞給其他致病菌，這樣動物機體的整體耐藥性將升高，對動物疾病的治療十分不利。因此，如何從水產宿主本身篩選出非致病性、對抗生素敏感的土著益生屎腸球菌，以作為優良的水產養殖微生物添加劑，是目前需要解決的技術問題。

發明內容

本發明針對現有技術的缺陷，提供一株從水產貝類中篩選分離出的既安全又具有益生特性的益生菌。該菌株耐熱性強、抗逆性高、益生性顯著，對常見水產致病菌維氏氣單胞菌具有較明顯抑制作用，并對大部分廣譜抗生素敏感。利用生理生化特征、16S rDNA方法鑒定，該菌株與屎腸球菌(Enterococcus faecium)顯示出最高的同源性(99％)，因此鑒定為屎腸球菌，并命名為屎腸球菌G12，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心，保藏編號為：CGMCC NO.15230，保藏日期為2018年1月17日。

優選的，屎腸球菌G12是從貝類肝胰臟內分離篩選得到。

進一步優選的，屎腸球菌G12是從菲律賓蛤仔肝胰臟內分離篩選得到。篩選之初，我們從菲律賓蛤仔肝胰臟內分離篩選得到12株菌株，本發明所申請的屎腸球菌為其中的第12株菌株，因此保藏時我們將其名稱為屎腸球菌G12。

本發明還提出該屎腸球菌G12在水產養殖中的應用，該應用是通過使屎腸球菌G12定殖于腸道中并發揮益生作用，可以顯著提高水產生物的存活率和增重率，對常見水產致病菌維氏氣單胞菌具有明顯抑制作用。

在該應用中，屎腸球菌包括至少一個下述的具體作用：

(1)提高水產生物存活率；

(2)提高水產生物增重率；

(3)抑制維氏氣單胞菌；

(4)不產生溶血素；

(5)0.9％的膽鹽耐受性；