[發明專利]一種豬丹毒SpaA蛋白及其在制備疫苗中的應用

有效

• 申請號: 201910442887.2
• 申請日: 2019-05-25
• 公開（公告）號: CN110183520B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 郭偉偉;向銀輝;劉大衛;鄒桂榮;劉新文;蔡聯燊;范根成;杜元釗
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/31;A61K39/02;A61P31/04
• 代理公司: 北京識然知識產權代理事務所(普通合伙) 11975
• 代理人: 曾慶國

本發明提供一種豬丹毒SpaA蛋白，其氨基酸序列為SEQ ID NO:1。本發明的豬丹毒桿菌SpaA蛋白用于制備疫苗或診斷試劑。本發明的豬丹毒桿菌SpaA蛋白制備的亞單位疫苗具有抗原穩定性高，純度高，特異性強，不產生其他不相關抗體，檢測方法方便準確的特點，為工業化生產豬丹毒亞單位疫苗和診斷試劑奠定了堅實的基礎。

技術領域

本發明屬于獸用生物制品技術領域，具體涉及一種豬丹毒SpaA蛋白及其在制備疫苗中的應用。

背景技術

豬丹毒(Swine erysipelas)是由豬丹毒桿菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)引起的一種人畜共患傳染病，其臨診特征主要為高熱、急性敗血癥、皮膚疹塊、慢性疣狀心內膜炎及皮膚壞死與多發性非化膿性關節炎。目前，該病在世界上大多數國家都有分布，呈散發或流行性發生，給養豬業造成了很大的經濟損失，也給人體健康帶來威脅。豬丹毒與豬瘟、豬肺疫并稱為中國養豬業的三大傳染病，造成嚴重的經濟損失。

目前，免疫接種仍是預防豬丹毒最有效的方法，主要使用傳統疫苗，即豬丹毒滅活菌苗和弱毒活菌苗。由于滅活過程可造成細菌抗原表位缺失或抗原性減弱，滅活苗不能產生足夠的保護力；弱毒苗的效力很容易受母源抗體和抗生素的干擾，且弱毒菌株存在毒力返強以及誘導隱性感染的可能性。而且豬丹毒的隱性感染可能會發展成慢性型，現有的疫苗不能對慢性豬丹毒產生足夠的保護力。因此，針對豬丹毒絲菌免疫保護性抗原研制亞單位疫苗，是豬丹毒新型亞疫苗研究的主要方向。

發明內容

本發明目的是提供一種豬丹毒SpaA蛋白以及使用SpaA蛋白制備的亞單位疫苗，從而彌補現有技術的不足。

本發明首先提供一種豬丹毒桿菌SpaA蛋白，包含有：

1)氨基酸序列為SEQ ID NO:1的蛋白；

2)在1)的蛋白上取代、缺失、添加一個或幾個氨基酸，且具有1) 中蛋白功能的蛋白；

編碼上述豬丹毒桿菌SpaA蛋白的基因，其核苷酸序列為SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3；

本發明的豬丹毒桿菌SpaA蛋白用于制備疫苗或診斷試劑。

本發明再一個方面提供一種亞單位疫苗，是使用上述的SpaA蛋白作為抗原制備的。

本發明的豬丹毒桿菌SpaA蛋白制備的亞單位疫苗具有抗原穩定性高，純度高，特異性強，不產生其他不相關抗體，檢測方法方便準確的特點，為工業化生產豬丹毒亞單位疫苗和診斷試劑奠定了堅實的基礎。

具體實施方式

本發明的目的是提供一種豬丹毒桿菌抗原蛋白(SpaA蛋白)，其在大腸桿菌中獲得可溶性的表達，制備亞單位疫苗，從而彌補現有技術的不足，有利于相關疾病的防制。

下面結合具體實施例對本發明進行詳細的說明。

實施例1：SpaA基因的擴增及序列分析

2019年湖北省某規模養豬場疑似發生豬丹毒，多頭育肥豬出現急性病死情況，臨床表現主要為發病突然，病豬體溫升高達42℃，全身皮膚發紅，尤以四肢內側、胸腹部、頸部和耳部等處發紅明顯，且在四肢末端和腹下等處出現紫色斑塊。經臨床調查和實驗室檢測，初步診斷為發生豬丹毒。經調查，確信上述的養豬場之前已經免疫過豬丹毒滅活疫苗和弱毒活菌苗，并且中和抗體的檢測確定免疫效果達到標準。因此懷疑有豬丹毒桿菌在疫苗的選擇壓力下發生了突變，無菌采集病死豬肺臟進行常規分離、鑒定，確定致病菌為豬丹毒桿菌。

1、擴增豬丹毒桿菌SpaA基因

根據NCBI中發表的豬丹毒桿菌SpaA基因序列，設計并合成了引物, 引物的序列信息如下：

primer1：5′-ATGAAAAAGAAAAAACACCTAT-3′；