[發(fā)明專利]一種犬細小病毒三價亞單位疫苗在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910442883.4 | 申請日： | 2019-05-25 |
| 公開（公告）號： | CN110157687A | 公開（公告）日： | 2019-08-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 郭偉偉;劉大衛(wèi);向銀輝;陳儉梅;范根成;杜元釗 | 申請（專利權(quán)）人： | 青島易邦生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N7/01 | 分類號： | C12N7/01;C12N15/866;A61K39/23;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 266009 山東省*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 犬細小病毒 亞單位疫苗 細小病毒 三價 種犬 重組桿狀病毒感染 重組桿狀病毒 氨基酸序列 病毒樣顆粒 核苷酸片段 抗體滴度 昆蟲細胞 疫苗免疫 抗原 制備 攜帶 感染 預(yù)防 | ||
本發(fā)明提供一種犬細小病毒三價亞單位疫苗，其中抗原為犬細小病毒的VP2蛋白病毒樣顆粒，是使用重組桿狀病毒感染昆蟲細胞后，培養(yǎng)收集獲得的；其中重組桿狀病毒，其攜帶有用于編碼VP2蛋白的核苷酸片段；所述的VP2蛋白，其氨基酸序列分別為SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9。本發(fā)明制備的疫苗免疫犬后能提高犬的抗體滴度，預(yù)防犬細小病毒的感染。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于疫苗制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種犬細小病毒三價亞單位疫苗。
背景技術(shù)
犬細小病毒主要感染犬科(Canidae)、貓科(Felidae)的動物，尤其對于幼犬，是一種急性、烈性傳染病，感染死亡率可達91％，健康犬經(jīng)消化道感染病毒后，表現(xiàn)腸炎癥狀和心肌炎癥狀(A fshar A.Canine Parvovirus infection-areview.Vet Bul l,1981,51:605-612.)。腸炎型癥狀為嚴重的嘔吐與嚴重的出血性腹瀉。心肌炎型幼犬多見，可以導(dǎo)致幼犬呼吸與心血管的衰竭。1980年以來，我國先后有發(fā)生本病的報道。近年來，犬細小病毒感染問題突出，該病在我國的發(fā)病率和致死率有上升的趨勢，給養(yǎng)犬業(yè)帶來重大經(jīng)濟損失，成為危害養(yǎng)犬業(yè)重大疫病之一。
犬細小病毒(Canine Parvovirus，CPV)屬細小病毒科細小病毒屬，為單股負鏈線性DNA病毒，無囊膜，對物理化學(xué)因素具有很強的抵抗力。CPV病毒基因組兩端各有6～10個回文序列，組成發(fā)夾樣的回文結(jié)構(gòu)。病毒編碼3種結(jié)構(gòu)蛋白(VP1、VP2、VP3)，其中VP2結(jié)構(gòu)蛋白是病毒刺激機體產(chǎn)生保護性抗體的重要抗原蛋白。自從發(fā)現(xiàn)以來，犬細小病毒經(jīng)過幾十年的進化，相繼出現(xiàn)了多種遺傳變異株，如CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c；但CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c之間的交叉保護差，普通的單苗不能完全預(yù)防犬細小病毒。
疫苗是預(yù)防和控制該病的主要措施，目前國內(nèi)主要使用弱毒苗和滅活苗，弱毒苗存在毒力返強，滅活苗免疫效果差。基因工程亞單位疫苗是現(xiàn)代基因工程技術(shù)的成果結(jié)晶，憑借其無可比擬的高安全性、穩(wěn)定性和低生產(chǎn)成本，使其成為現(xiàn)代疫苗制備領(lǐng)域的寵兒，亞單位疫苗尤其是類病毒樣顆粒疫苗(Virus like particles，VLPs)，這類疫苗不含有核酸物質(zhì)，安全性較好，接種后不會產(chǎn)生持續(xù)感染或潛伏感染，產(chǎn)生的免疫應(yīng)答可以與野毒感染相區(qū)分，有利于疫病的控制和消滅。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種犬細小病毒三價亞單位疫苗，從而彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足。
本發(fā)明首先提供一種重組桿狀病毒，其攜帶有用于編碼VP2蛋白的核苷酸片段；所述的VP2蛋白，其氨基酸序列分別為SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；
所述的核苷酸片段，其序列分別為SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；
本發(fā)明所構(gòu)建的重組桿狀病毒用于在昆蟲細胞中制備犬細小病毒的VP2蛋白病毒樣顆粒；
本發(fā)明再一個方面提供一種犬細小病毒的VP2蛋白病毒樣顆粒，是使用上述的重組桿狀病毒感染昆蟲細胞后，培養(yǎng)收集獲得的。
所述的昆蟲細胞為昆蟲細胞Sf9；
本發(fā)明所制備的病毒樣顆粒用于制備疫苗；
本發(fā)明還提供一種犬細小病毒亞單位疫苗，包括有抗原和疫苗佐劑，其所用的抗原為本發(fā)明制備的病毒樣顆粒；
本發(fā)明制備的疫苗免疫犬后能提高犬的抗體滴度，能同時預(yù)防犬細小病毒的三種不同型的病毒的感染，解決了臨床上不同型的犬細小同時感染，而現(xiàn)有疫苗不能夠提供全面保護的難題。
具體實施方式
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