[發明專利]一種細菌來源的果膠酶及其基因

在審

• 申請號: 201910442042.3
• 申請日: 2019-05-24
• 公開（公告）號: CN110066818A
• 公開（公告）日: 2019-07-30
• 發明（設計）人: 葉秀云;關怡;尹娣;王冬煌;呂超
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N15/56;C12N15/55;C12N9/88;C12N9/26;C12N9/18;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/10;C12R1/19
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

1.一種果膠酶基因，其特征在于：所述果膠酶基因其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.權利要求1所述的基因編碼的果膠酶，其特征在于：所述果膠酶氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

3.一種含如權利要求1所述的果膠酶基因的重組載體，其特征在于：所述果膠酶基因的載體是大腸桿菌質粒。

4.根據權利要求3所述的重組載體，其特征在于：所述的載體為pET22b(+)-Pectinase。

5.一種含權利要求1所述的果膠酶基因的細胞，其特征在于：所述細胞選大腸桿菌細胞；所述細胞由權利要求3所述載體轉化而得。

6.一種如權利要求1所述的果膠酶基因的的制備方法，其特征在于：從環境中篩選得到一株能在篩選培養基上產透明圈的微生物，通過16s rDNA分析鑒定為Bacillus licheniformis；根據NCBI中已有的果膠酶基因序列設計特異性引物，獲得果膠酶的基因全長。

7.一種如權利要求3所述的重組載體的制備方法，其特征在于：所述果膠酶基因的重組載體的制備為：Bam HI、Hind Ⅲ雙酶切空質粒pET22b(+)與果膠酶基因進行同源重組，得到大腸重組表達載pET22b(+)-Pectinase。

8.一種如權利要求5所述細胞的構建方法，其特征在于：所述細胞是用所述重組載體轉化來構建的；所述細胞選大腸桿菌細胞，選用大腸桿菌構建表達Pectinase的重組細胞。

9.一種如權利要求2所述的果膠酶的表達方法，其特征在于：培養包含Pectinase編碼序列的細胞或經轉化的細胞，誘導其表達，收獲表達產物：通過包含果膠酶編碼序列的大腸桿菌發酵來生產果膠酶，并通過鎳柱純化得到了純酶形式的目的蛋白。