[發(fā)明專(zhuān)利]一種木霉T6菌株對(duì)植物病原線蟲(chóng)作用的觀察測(cè)定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910437672.1
• 申請(qǐng)日: 2019-05-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110074064A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張樹(shù)武;徐秉良;劉佳;李通
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01K67/033
• 分類(lèi)號(hào): A01K67/033;C12Q1/02
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 王新生

1.一種木霉T6菌株對(duì)植物病原線蟲(chóng)作用的觀察測(cè)定方法，其特征在于，木霉T6菌株對(duì)禾谷孢囊線蟲(chóng)孢囊、2齡幼蟲(chóng)和蟲(chóng)卵的寄生和致死作用顯微觀察包括以下步驟：

S1、對(duì)于孢囊，在高溫滅菌的培養(yǎng)皿中加入表面消毒且發(fā)育較一致的孢囊和濃度為1.5×10⁵-10⁷cfu·mL^-1木霉T6菌株孢子懸浮液；

對(duì)于2齡幼蟲(chóng)和蟲(chóng)卵，在高溫滅菌的培養(yǎng)皿中加入新孵化的2齡幼蟲(chóng)或蟲(chóng)卵并分別向各處理中加入不同濃度(1.5×10⁵-10⁷cfu·mL^-1)木霉T6菌株分生孢子懸浮液；

S2、孢囊、2齡幼蟲(chóng)和蟲(chóng)卵均以加入尖孢鐮刀菌孢子懸浮液和無(wú)菌水分別作為對(duì)照，每隔兩天在顯微鏡下觀察和記錄孢囊、2齡幼蟲(chóng)和蟲(chóng)卵被寄生和致死過(guò)程；

對(duì)孢囊、2齡幼蟲(chóng)和蟲(chóng)卵的寄生和致死作用測(cè)定包括以下步驟：

S3、對(duì)于孢囊，在高溫滅菌的培養(yǎng)皿中加入表面消毒且發(fā)育較一致的孢囊，加入不同濃度木霉T6菌株孢子懸浮液；

對(duì)于2齡幼蟲(chóng)或蟲(chóng)卵，在高溫滅菌的細(xì)胞培養(yǎng)板中加入新孵化的禾谷孢囊線蟲(chóng)2齡幼蟲(chóng)或禾谷孢囊線蟲(chóng)卵懸浮液，并分別向各處理中加入不同濃度的木霉T6菌株分生孢子懸浮液；

S4、孢囊、2齡幼蟲(chóng)和蟲(chóng)卵均加入尖孢鐮刀菌孢子懸浮液和無(wú)菌水分別作為對(duì)照，每隔兩天鏡檢各處理和對(duì)照中孢囊被寄生和孵化、植物病原線蟲(chóng)2齡幼蟲(chóng)的死亡以及蟲(chóng)卵寄生或孵化情況。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種木霉T6菌株對(duì)植物病原線蟲(chóng)作用的觀察測(cè)定方法，其特征在于：所述S2中孢囊、2齡幼蟲(chóng)和蟲(chóng)卵試驗(yàn)均包括5個(gè)處理，每個(gè)處理和對(duì)照6個(gè)重復(fù)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種木霉T6菌株對(duì)植物病原線蟲(chóng)作用的觀察測(cè)定方法，其特征在于：所述S2、S4中試驗(yàn)要求溫度為20℃恒溫。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種木霉T6菌株對(duì)植物病原線蟲(chóng)作用的觀察測(cè)定方法，其特征在于：所述S4試驗(yàn)中共設(shè)置5個(gè)處理和2個(gè)對(duì)照，孢囊的每個(gè)處理對(duì)照6個(gè)重復(fù)，2齡幼蟲(chóng)和蟲(chóng)卵每個(gè)處理對(duì)照均重復(fù)24孔。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種木霉T6菌株對(duì)植物病原線蟲(chóng)作用的觀察測(cè)定方法，其特征在于：所述S4中孢囊被寄生和孵化、2齡幼蟲(chóng)的死亡以及蟲(chóng)卵寄生或孵化計(jì)算方式如下：

按照公式(1)計(jì)算孢囊寄生率和公式(2)計(jì)算孢囊孵化的相對(duì)抑制率，

孢囊寄生率(％)＝(處理孢囊寄生的數(shù)量/供試孢囊的數(shù)量)×100 (1)

孢囊孵化的相對(duì)抑制率(％)＝(對(duì)照孵化的幼蟲(chóng)數(shù)量-處理孵化的幼蟲(chóng)數(shù)量)/對(duì)照孵化的幼蟲(chóng)數(shù)量×100 (2)

按照公式(3)、(4)、(5)計(jì)算2齡幼蟲(chóng)死亡率，校正死亡率、回歸方程；

死亡率(％)＝(死亡2齡幼蟲(chóng)數(shù)量/供試2齡幼蟲(chóng)數(shù)量)×100 (3)

校正死亡率(％)＝(處理死亡率-對(duì)照死亡率)/(1-對(duì)照死亡率)×100 (4)

2齡幼蟲(chóng)的寄生率(％)＝(處理后被寄生2齡幼蟲(chóng)數(shù)量/供試2齡幼蟲(chóng)數(shù)量)×100 (5)

按照公式(6)計(jì)算卵的寄生率和公式(7)計(jì)算卵孵化的相對(duì)抑制率。

卵寄生率(％)＝(處理卵的寄生數(shù)量/供試卵的數(shù)量)×100 (6)

卵孵化的相對(duì)抑制率(％)＝(對(duì)照孵化的線蟲(chóng)數(shù)量-處理孵化的線蟲(chóng)數(shù)量)/對(duì)照孵化的線蟲(chóng)數(shù)量×100 (7) 。