[發(fā)明專利]一種與豬肌纖維面積和肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的分子標(biāo)記、檢測(cè)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910434597.3
• 申請(qǐng)日: 2019-05-23
• 公開（公告）號(hào): CN110079614B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐學(xué)文;馬婷婷;趙書紅;李新云;謝勝松;李小平;劉小磊;劉炎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

本發(fā)明屬于分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種與豬肌纖維面積和肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的分子標(biāo)記、檢測(cè)方法及其應(yīng)用。目的在于得到一種與豬的豬肌纖維面積和肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的分子標(biāo)記，并建立一種能夠在較短時(shí)間內(nèi)判斷豬肌纖維面積和肌內(nèi)脂肪含量的方法，從而判斷肉質(zhì)嫩度，并輔助育種。其技術(shù)方案要點(diǎn)包括：本發(fā)明根據(jù)TNNC2基因在第一外顯子上的INDEL突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物并進(jìn)行擴(kuò)增，利用限制性內(nèi)切酶BsmAI對(duì)該位點(diǎn)進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，根據(jù)多態(tài)性檢測(cè)的結(jié)果來(lái)區(qū)分豬個(gè)體間的肌纖維面積的大小與肌內(nèi)脂肪含量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種與豬肌纖維面積和肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的分子標(biāo)記、檢測(cè)方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

我國(guó)是豬肉生產(chǎn)和消費(fèi)的大國(guó)，長(zhǎng)期以來(lái)，豬的生長(zhǎng)速度、瘦肉率、飼料轉(zhuǎn)化效率以及出欄量等指標(biāo)一直是養(yǎng)豬生產(chǎn)工作關(guān)注的重點(diǎn)。但對(duì)產(chǎn)肉量的高強(qiáng)度選擇使得肉的品質(zhì)大幅度下降。隨著人們物質(zhì)生活水平的提高，優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)的豬肉逐漸成為消費(fèi)者選擇的重點(diǎn)，而肉質(zhì)的嫩度則是影響消費(fèi)者選擇的重要因素之一，因此，對(duì)于肉質(zhì)嫩度的遺傳改良逐漸成為育種工作的重要研究方向。

現(xiàn)有研究表明，肉質(zhì)的嫩度與肌纖維的面積、肌內(nèi)脂肪含量存在密切關(guān)系。其中，單根肌纖維的面積越小，則其剪切力越低，表現(xiàn)出的嫩度特性較好。肌內(nèi)脂肪含量(intramuscularfat,IMF)通常被認(rèn)為與嫩度，多汁性和風(fēng)味呈正相關(guān)，當(dāng)豬肉中肌內(nèi)脂肪含量高時(shí)，則肌肉的剪切力降低，嫩度增加。

目前，對(duì)肌纖維面積以及肌內(nèi)脂肪含量的測(cè)定需要將豬屠宰后才能進(jìn)行，不僅增加了人工選擇的成本，也在一定程度上限制了豬的遺傳研究的發(fā)展。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，通過分子標(biāo)記對(duì)肉質(zhì)性狀實(shí)施早期選擇逐漸成為育種的重要手段。

近年來(lái)，關(guān)于影響脂肪沉積的分子標(biāo)記研究較多，例如心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(Heart-type Fatty Acid-Binding Protein,H-FABP、脂肪細(xì)胞脂肪酸結(jié)合蛋白(Adipocyte fatty Acid-Binding Protein,A-FABP)以及脂蛋白脂肪酶(lipoproteinlipase,LPL)均被認(rèn)為是影響豬脂肪沉積的候選基因。盡管在豬肉質(zhì)性狀相關(guān)候選基因的鑒定及應(yīng)用方面取得了一些進(jìn)展，但與肌纖維性狀和肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的候選基因研究進(jìn)展緩慢。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)提供了一種與豬肌纖維面積和肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的分子標(biāo)記、檢測(cè)方法及其應(yīng)用，目的在于得到一種與豬的豬肌纖維面積和肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的分子標(biāo)記，并建立一種能夠在較短時(shí)間內(nèi)判斷豬肌纖維面積和肌內(nèi)脂肪含量的方法，從而判斷肉質(zhì)嫩度，并輔助育種。

本發(fā)明的第一目的是提供一種與豬肌纖維面積和肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記位于TNNC2基因中，所述分子標(biāo)記序列為:

(1)如SEQ ID NO:4所示，該序列位于TNNC2基因第一外顯子處，用于檢測(cè)剪接供體的缺失；

(2)如SEQ ID NO:5所示，該序列位于TNNC2基因第一外顯子處，用于檢測(cè)片段插入突變；

上述兩種突變呈完全偶聯(lián)關(guān)系。

本發(fā)明的第二目的是提供利用上述的分子標(biāo)記檢測(cè)豬TNNC2基因突變的方法，包括以下步驟：

S1：設(shè)計(jì)引物，針對(duì)TNNC2基因在第一外顯子區(qū)域檢測(cè)到的剪接供體的缺失和片段插入突變，設(shè)計(jì)特異性引物：

TNNC2_M1_F:5’CCTATCGCCACCTTACTGTCAC 3’，見SEQ ID NO:6；

TNNC2_M1_R:5’CAGCTGAAGAATAATGCAATGC 3’，見SEQ ID NO:7；

S2：對(duì)豬的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

S3：對(duì)PCR產(chǎn)物酶切，并進(jìn)行電泳判斷基因型。