[發明專利]一種大體積干細胞外泌體分離濃縮裝置及濃縮工藝

在審

• 申請號: 201910432961.2
• 申請日: 2019-05-23
• 公開（公告）號: CN111979089A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 朱希燦
• 申請（專利權）人: 比歐泰克生物技術服務(北京)有限公司
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12M1/24;C12M1/38;C12M1/34;C12N5/0775
• 代理公司: 北京智行陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 11738
• 代理人: 黃錦陽

本發明公開了一種大體積干細胞外泌體分離濃縮裝置及濃縮工藝，一種大體積干細胞外泌體分離濃縮裝置，包括分離離心機主體、放置箱、轉動控溫組件、試管夾持組件、試管、鉸鏈、頂蓋、密封套環、密封墊、磁鐵塊和軸承，所述分離離心機主體的外壁設置有放置箱；該設置，其中轉動盤上能進行多個試管的放置，使能進行多組離心分離，利于大體積干細胞外泌體的濃縮提取；提高了外泌體濃縮提取的效率；通過密封套環和密封墊的設置，保證離心機內部的密封，避免了分離濃縮時細胞的污染；能通過冷凝管和溫度計配合使用能進行離心機內部溫度的控制，工藝中對離心時間、離心溫度和離心速度進行規范，提高了后期外泌體分離濃縮的質量。

技術領域

本發明涉及細胞分離技術領域，具體為一種大體積干細胞外泌體分離濃縮裝置及濃縮工藝。

背景技術

細胞外泌體是由細胞內多泡體與細胞膜融合后釋放到細胞外隙或生物學體液中的膜性囊泡，參與人體許多重要的生理或病例過程，在細胞通訊、細胞遷移、促進組織修復或調節免疫反應等作用，具有廣闊的應用前景，獲得高純度的細胞外泌體一直是展開應用研究的前提；傳統外泌體濃縮提取方法主要采用超速離心法或昂貴的試劑盒過柱子法，在超速離心法的過程中使用的分離離心機結構較為傳統，不能進行大體積干細胞外泌體的濃縮提取，且不能保證離心機內部的密封，容易造成細胞污染，影響外泌體的提取，在現有干細胞外泌體的濃縮工藝中，其中離心時間或者離心速度沒有進行規范，影響外泌體的分離濃縮工藝。

發明內容

本發明的目的在于提供一種大體積干細胞外泌體分離濃縮裝置及濃縮工藝，以解決上述背景技術中提出的問題。

為了解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案：一種大體積干細胞外泌體分離濃縮裝置，包括分離離心機主體、放置箱、轉動控溫組件、試管夾持組件、試管、鉸鏈、頂蓋、密封套環、密封墊、磁鐵塊和軸承，所述分離離心機主體的外壁設置有放置箱，所述放置箱的頂端內壁上設置有轉動控溫組件；

所述轉動控溫組件包括放置槽、電機、固定板、轉動盤、儲水腔、冷凝管和溫度計，所述放置箱的頂端內壁上開設有放置槽，所述放置槽的底端外壁中心處螺栓固定有電機，所述放置槽位于電機上方的兩側內壁上焊接固定有固定板，所述放置槽位于固定板上方設置有轉動盤，所述電機的輸出軸一端貫穿固定板與轉動盤的底端外壁中心處固定連接，所述放置箱位于放置槽兩側的內壁上開設有儲水腔，所述儲水腔的底端兩側內壁上固定安裝有冷凝管，所述放置箱的一側外壁上對應儲水腔鑲嵌安裝有溫度計，所述轉動盤的頂端外壁上通過試管夾持組件固定有試管；

所述試管夾持組件包括固定槽、固定夾塊、配合槽、彈簧、移動塊和移動夾塊，所述轉動盤的頂端外壁上分布開設有固定槽，所述固定槽的內部放置有試管，所述固定槽位于試管一側的內壁上鑲嵌固定有固定夾塊，所述固定槽位于試管另一側的內壁上開設有配合槽，所述配合槽的一側內壁上焊接固定有彈簧，所述配合槽內部位于彈簧一側的內壁上設置有移動塊，所述移動塊的一側外壁上焊接固定有移動夾塊，且移動夾塊的一端貫穿于配合槽的外部與試管的一側外壁接觸連接，所述放置箱的頂端一側外壁上通過鉸鏈連接有頂蓋，所述底端外壁中心處對應試管固定連接有密封套環。

一種大體積干細胞外泌體的濃縮工藝，包括以下步驟，步驟一，干細胞培養；步驟二，裝置用前處理；步驟三，外泌體粗液提取；步驟四，離心濃縮；步驟五，干細胞外泌體提取；

其中上述步驟一中，篩選出細胞狀態良好、增殖能力強的間質干細胞，將間質干細胞放置到培養基中培養2～3天，其中在在細胞培養基中添加干擾素、EPO和PDGF-BB；

其中上述步驟二中，取用大體積干細胞外泌體分離濃縮裝置，通過用醫用殺菌液對裝置放置槽內部進行擦拭，并用高溫進行烘干，完成分離濃縮裝置的用前處理；

其中上述步驟三中，對步驟一中集培養基的上清液進行收集，將上清液裝入到離心試管中，再將離心試管插接夾持在裝置的轉動盤上，通過分離濃縮裝置工作對上清液進行離心，離心后收集試管中的上層液，得到干細胞外泌體粗液；