[發明專利]一種用于診斷IgA腎病的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201910432274.0
• 申請日: 2019-05-23
• 公開（公告）號: CN110108889B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發明（設計）人: 鄭豐;呂廣鑫;生杰;葉明亮;秦洪強
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 李銀姬;李馨

本發明提供一種用于診斷IgA腎病的試劑盒，該試劑盒包括能夠捕捉離體樣品中的IgA1的試劑，該試劑為TINAGL1蛋白、能夠穩定表達TINAGL1蛋白的質?；驅⑺瞿軌蚍€定表達TINAGL1蛋白的質粒轉染得到的能夠表達TINAGL1蛋白的細胞，可以利用免疫熒光方法，通過IgA1?TINAGL1免疫復合物的形成檢測離體樣品中的IgA1，來診斷IgAN的發生，實現了對IgA腎病的無創檢測。同時，本發明提供了能夠與IgAN患者血液等循環組織中的IgA1形成復合物的、可用于診斷IgAN的新的生物標志物TINAGL1，為IgAN的治療和研究提供了新的方向，具有廣泛應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種免疫組合物及其在制備IgA腎病診斷試劑盒中的用途。

背景技術

IgA腎病(IgA nephrophy，IgAN)是最常見的原發性腎小球疾病，我國是IgA腎病高發國家。80％的IgA腎病患者為青壯年，絕大多數患者病情呈慢性進行性發展，其中大約1/3的患者在發病10～20年后進展到終末期腎衰竭-尿毒癥，IgAN是我國終末期腎衰竭的主要病因之一。IgAN是在腎小球系膜區出現IgA或IgA免疫復合物沉積而命名的疾病。目前診斷該病的金標準為腎活檢，即通過檢測其腎小球系膜區是否有IgA沉積為診斷標準，但腎活檢屬于有創檢查，對患者的損傷較大。此外，目前臨床上多通過檢測24h尿蛋白定量血肌酐，尿微量白蛋白以及腎小球濾過率來評價病情及預后，然而這些檢測指標影響因素較多，靈敏度和特異性較差。所以目前主要研究熱點旨在尋找一種標記物，能通過無創檢測血/尿及相關基因明確診斷該疾病，減少或避免有創檢查帶來的痛苦和傷害，是目前腎臟病研究的重點和難點，更是臨床的迫切需求。

目前，IgA腎病發病機制尚未明確闡明，且缺乏針對性的有效治療方案，多種因素在發病的不同環節起作用。其中，致病性IgA1分子的形成可能是IgAN發病的使動環節，而且可能是有別于其他腎小球疾病發病機制的關鍵環節。

發明內容

針對上述現有技術中存在的問題，本發明目的在于提供能夠無創的、高特異性和靈敏度地診斷IgA腎病的生物標志物。本發明發現相對于健康人患有IgA腎病患的IgA1更容易與TINAGL1形成免疫復合物，可通過檢測該免疫復合物，實現對IgA腎病的無創檢測，能夠準確診斷IgA腎病的發生。

本發明的技術方案如下：

本發明提供一種用于診斷IgA腎病的試劑盒，該試劑盒包括能夠捕捉離體樣品中的IgA1的試劑，該試劑為TINAGL1蛋白、能夠穩定表達TINAGL1蛋白的質粒或將所述能夠穩定表達TINAGL1蛋白的質粒轉染得到的能夠表達TINAGL1蛋白的細胞。

本發明中，所述離體樣品中的IgA1可以理解為IgA1單體本身，或含有IgA1的復合物，如TINAGL1-IgA1免疫復合物。

進一步地，在上述技術方案中，所述試劑包被于固體載體。所述試劑，即TINAGL1蛋白可以包被于固體載體，如聚苯乙烯。能夠穩定表達TINAGL1蛋白的質粒，可轉染于細胞，獲得能夠穩定表達TINAGL1蛋白的細胞，作為宿主細胞，將該宿主細胞固定于固體載體上，所表達的TINAGL1蛋白可作為抗原，用于捕捉離體樣品中的IgA1。所述固體載體可以為能夠適用于免疫熒光檢測體系的24孔板、96孔板、玻璃片等。

進一步地，在上述技術方案中，所述的試劑盒還包括標記物標記的抗IgA1特異性抗體。所述標記物可以為本領域常規的能夠用于免疫熒光檢測的標記物，可以為酶、輔基、熒光物質，生物發光物質等。通過上述標記物，能夠定性或定量地測定與TINAGL1形成復合物的離體樣品中的IgA1。所述標記物優選，可采用生物素、辣根過氧化物、熒光素等。

進一步地，在上述技術方案中，所述的試劑盒還包括抗TINAGL1特異性抗體。所述抗TINAGL1特異性抗體可固定于固體載體中，可作為捕捉離體樣品中的IgA1的試劑，即能夠捕捉離體樣品中含有IgA1的復合物，如TINAGL1-IgA1免疫復合物，進而用于診斷IgA腎病。