[發明專利]嗜熱菌來源的賴氨酸脫羧酶的異源表達方法及其應用

有效

• 申請號: 201910431317.3
• 申請日: 2019-05-22
• 公開（公告）號: CN111978407B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發明（設計）人: 陳玲;周豪宏;雷云鳳;劉修才
• 申請（專利權）人: 上海凱賽生物技術股份有限公司;CIBT美國公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/88;C12N15/62;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.帶有促溶標簽的賴氨酸脫羧酶融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含促溶標簽和來自嗜熱菌的賴氨酸脫羧酶，二者之間通過Linker連接；

其中，所述促溶標簽選自熒光蛋白、麥芽糖結合蛋白、谷胱甘肽轉移酶或它們的組合。

2.根據權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述熒光蛋白選自紅色熒光蛋白、藍色熒光蛋白、藍綠色熒光蛋白、綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、橙色熒光蛋白或光學加亮熒光蛋白；優選RedStar、tdtomato或mCherry中的任意一種或幾種的組合；和/或，

所述賴氨酸脫羧酶選自以下①～④中任一個：①來源于嗜熱菌Thermosynechoccuselongatus的賴氨酸脫羧酶TeLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者與SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；②來源于Tepidanaerobactersyntrophicus的賴氨酸脫羧酶TsLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:84所示，或者與SEQ IDNO:84具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；③來源于Geobacilluskaustophilus的賴氨酸脫羧酶GkLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:86所示，或者與SEQ IDNO:86具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；④來源于Thermomicrobium roseum的賴氨酸脫羧酶TrLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:88所示，或者與SEQ ID NO:88具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列。

3.以熒光蛋白為促溶標簽的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含熒光蛋白和目標蛋白，二者之間通過Linker連接；

其中，所述熒光蛋白的定義同權利要求2中所述。

4.根據權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，其為紅色熒光蛋白-Linker-來自嗜熱菌的賴氨酸脫羧酶，或來自嗜熱菌的賴氨酸脫羧酶-Linker-紅色熒光蛋白；

優選地，所述賴氨酸脫羧酶選自以下①～④中任一個：①來源于嗜熱菌Thermosynechoccus elongatus的賴氨酸脫羧酶TeLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者與SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；②來源于Tepidanaerobacter syntrophicus的賴氨酸脫羧酶TsLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:84所示，或者與SEQ ID NO:84具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；③來源于Geobacillus kaustophilus的賴氨酸脫羧酶GkLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:86所示，或者與SEQ ID NO:86具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；④來源于Thermomicrobium roseum的賴氨酸脫羧酶TrLDC，其氨基酸序列如SEQ ID NO:88所示，或者與SEQ ID NO:88具有至少95％序列同一性，且具有同等功能的氨基酸序列；

更優選地，所述融合蛋白為紅色熒光蛋白-Linker-TeLDC，紅色熒光蛋白-Linker-TsLDC，紅色熒光蛋白-Linker-GkLDC，或紅色熒光蛋白-Linker-TrLDC；

其中，所述Linker包括螺旋形式的Linker或低疏水性、低電荷效應的氨基酸組成的柔性Linker，所述Linker的長度至少為10個氨基酸；

優選地，所述Linker為柔性Linker，更優選為(GGGGS)₃或(SG)_5-8；

所述紅色熒光蛋白選自RedStar、tdtomato或mCherry中的任意一種或幾種的組合。

5.聚核苷酸，其特征在于，所述聚核苷酸編碼權利要求1-4任一項所述融合蛋白。

6.熒光蛋白作為促溶標簽在異源蛋白表達中的應用，其中，所述熒光蛋白的定義同權利要求2中所述。