[發(fā)明專利]一種對活細胞中Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定系統(tǒng)及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910429015.2
• 申請日: 2019-05-22
• 公開（公告）號: CN110411991A
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張麗果;劉曉潔;汲振余;張建營;代麗萍;彭穎;何美霞;張燦;高璐;范丹丹;劉靜靜;趙陽;楊靜;裘一兵
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/01
• 代理公司: 鄭州匯科專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 41147
• 代理人: 李偉

1.一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定系統(tǒng)，它包括信號發(fā)生器，其特征在于：所述的信號發(fā)生器與功率放大器相連，所述的功率放大器與防水超聲探頭相連，所述的防水超聲探頭位于自制共聚焦培養(yǎng)皿的底面上且淹沒在自制共聚焦培養(yǎng)皿內(nèi)的溶液中，所述的自制共聚焦培養(yǎng)皿放置于激光共聚焦顯微鏡的載物架上，所述的自制共聚焦培養(yǎng)皿的下方設(shè)置有激光共聚焦顯微鏡鏡頭，所述的自制共聚焦培養(yǎng)皿的上方與激光共聚焦顯微鏡鏡頭正對應(yīng)的位置設(shè)置有激光共聚焦顯微鏡激光器，所述的激光共聚焦顯微鏡鏡頭與數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)相連。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定系統(tǒng)，其特征在于：所述的信號發(fā)生器的超聲發(fā)射頻率和功率可調(diào)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定系統(tǒng)，其特征在于：所述的功率放大器的頻寬為0.1MHz-5MHz。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定系統(tǒng)，其特征在于：所述的自制共聚焦培養(yǎng)皿采用厚度為1-2mm的玻璃制成的長方體結(jié)構(gòu)，在自制共聚焦培養(yǎng)皿的底面上設(shè)置有一矩形通孔，所述的自制共聚焦培養(yǎng)皿的底面上矩形通孔的上方密封黏貼有一鋼化玻璃薄膜。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定系統(tǒng)，其特征在于：所述的自制共聚焦培養(yǎng)皿的尺寸為：長160mm、寬100mm、高600mn，所述的自制共聚焦培養(yǎng)皿底面的矩形通孔的尺寸為：長100m、寬30mm，所述的鋼化玻璃薄膜的尺寸為：長130mm、寬80mm。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定系統(tǒng)，其特征在于：所述的鋼化玻璃薄膜的厚度為0.2mm。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定系統(tǒng)，其特征在于：所述的防水超聲探頭位于自制共聚焦培養(yǎng)皿內(nèi)矩形通孔的一側(cè)，所述的防水超聲探頭面向矩形通孔，且防水超聲探頭的中心線與矩形通孔的水平中心線平行設(shè)置。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定方法，其特征在于，它包括以下步驟：

步驟1，采用siRNA干擾生物技術(shù)對細胞膜上的表達蛋白Piezo1進行抑制；

步驟2，分別制備出Piezo1蛋白表達降低的細胞模型 和沒有進行蛋白表達降低處理的原生細胞模型 ；

步驟3，在自制共聚焦培養(yǎng)皿中加入完全培養(yǎng)基分別培養(yǎng)細胞模型 和 ，在其達到60%的融合度時，倒掉自制共聚焦培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，并在清洗細胞之后，分別加入含有鈣離子的Hank’s溶液，然后加入鈣離子熒光指示劑Fluo-4 AM至濃度為5μmol/L，避光培育60分鐘；

步驟4，將培養(yǎng)有 和 的自制共聚焦培養(yǎng)皿放置于激光共聚焦顯微鏡的載物架，用防水超聲探頭在超聲刺激強度為0W和0.05W兩種情況下分別對 和 細胞進行超聲刺激，并用激光共聚焦顯微鏡的鏡頭實時獲取兩自制共聚焦培養(yǎng)皿中細胞中的鈣離子熒光強度，該熒光強度對應(yīng)鈣離子濃度。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定方法，其特征在于：所述的步驟3中避光培育的溫度為37℃，培養(yǎng)時間為1小時。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種對活細胞膜上Piezo1蛋白的超聲敏感性的鑒定方法，其特征在于：所述的步驟3中的Hank’s溶液的液面高為40mm。