[發明專利]與番茄雄性不育突變位點ms-32共分離的分子標記、特異性引物及其應用

有效

• 申請號: 201910426674.0
• 申請日: 2019-05-22
• 公開（公告）號: CN110184377B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 黃澤軍;劉曉燕;杜永臣;王孝宣;國艷梅;李君明;劉磊;舒金帥
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京法信智言知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11737
• 代理人: 劉靜榮

本發明屬于農業生物技術工程和蔬菜遺傳育種領域，具體涉及與番茄雄性不育突變位點ms?32共分離的分子標記及其應用。所述的分子標記為可以檢測ms?32位點中SNP的dCAPS分子標記MS32D。本發明可以替代傳統的通過在開花期選擇雄性不育植株以確保番茄育種材料含有雄性不育突變位點ms?32的方法。利用本發明的分子標記可以在苗期輔助選擇含有ms?32突變位點的純合植株和雜合植株，從而縮短育種周期、提高育種效率。

技術領域

本發明屬于農業生物技術工程和蔬菜遺傳育種領域，具體涉及與番茄雄性不育突變位點ms-32共分離的分子標記、特異性引物及其應用。

背景技術

番茄是中國乃至世界上最重要的蔬菜之一。番茄的雜種優勢表現比較明顯，目前種植的品種多為雜交種。然而，目前番茄雜交種制種多采用人工去雄、授粉方法，不但費時、費工、制種成本高，而且可能因為去雄不及時或不徹底，影響雜交種純度。

植物雄性不育廣泛存在于開花植物中。利用雄性不育系制種可以簡化程序、節省人工、提高純度。目前，利用番茄雄性不育系制種，雜交種種子生產量可達到3000kg/年。所用的番茄雄性不育系有ms-10(male sterile-10)、ms-15、ms-26、ms-32、ms-35、ms-47、ps(positional sterility)、ps-2等，其中ms-10和ms-35為等位突變，ms-15、ms-26和ms-47為等位突變。番茄雄性不育突變體ms-32幾乎100％不育，雄蕊略小于正常植株，柱頭外露率近100％，可以不需要人工去雄而直接授粉，授粉后坐果正常，因此已經被嘗試用于番茄雜交種制種。但是ms-32為隱性突變，如果通過表型鑒定以確保育種材料中含有ms-32位點，該育種材料必須含有純合的ms-32位點，并且需等到開花期才能進行表型鑒定，在轉育ms-32位點時，除了幾輪回交過程，還需要幾輪自交過程，從而導致育種周期長、效率低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種與番茄雄性不育突變位點ms-32共分離的分子標記MS32D的特異性引物。

本發明的再一目的在于提供上述特異性引物的應用。

本發明的再一目的在于提供與番茄雄性不育突變位點ms-32共分離的分子標記。

本發明的再一目的在于提供一種鑒定番茄雄性不育突變位點ms-32的方法。

根據本發明具體實施方式的與番茄雄性不育突變位點ms-32共分離的分子標記MS32D的特異性引物，所述特異性引物如下：

正向引物MS32D F：5-GATGATTGCGTGCATCTTGG-3，

反向引物MS32D R：5-CGAAGGGTTATCTTGTGATCAAGCGACTT-3。

PCR產物用限制性內切酶DdeI進行酶切。

根據本發明具體實施方式的與番茄雄性不育突變位點ms-32共分離的分子標記，所述分子標記通過以下步驟獲得：

(1)番茄雄性不育突變體材料LA2714自交，得到不育植株ms-32；

(2)利用ms-32與醋栗番茄LA1589雜交后自交所得F₂代群體中的不育株，將MS-32基因初步定位在分子標記HP4547到HP1693之間；

(3)利用ms-32與醋栗番茄LA1589雜交后自交所得F₂代群體，將MS-32基因精細定位在分子標記LXY1和LXY5之間；

(4)通過SNP分析，LXY1和LXY5之間的Solyc01g081100基因編碼區的第一外顯子存在G到A的SNP，其物質位置為SL3.0ch01:80,292,291，確定為不育基因MS-32的共分離分子標記。