[發明專利]一種產麥芽四糖淀粉酶的基因工程菌及其發酵工藝在審

申請號：	201910408975.0	申請日：	2019-05-16
公開（公告）號：	CN110144320A	公開（公告）日：	2019-08-20
發明（設計）人：	吳敬;宿玲恰;楊亞楠	申請（專利權）人：	江南大學
主分類號：	C12N1/21	分類號：	C12N1/21;C12N15/75;C12N9/24;C12N15/56;C12R1/125
代理公司：	哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211	代理人：	林娟
地址：	214000 江***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	淀粉酶麥芽四糖基因工程菌發酵工藝生產成本發酵工程技術宿主發酵產酶基因工程菌株產酶生產菌株發酵罐酶活力構建菌株
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【權利要求書】：

1.一種產麥芽四糖淀粉酶的基因工程菌，其特征在于，以枯草芽孢桿菌為宿主，以pHY300PLK為表達載體，表達氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的麥芽四糖淀粉酶。

2.如權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，以Bacillus subtilisWS11為宿主。

3.如權利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，所述麥芽四糖淀粉酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一種權利要求1-3任一所述的基因工程菌的構建方法，其特征在于，是將核苷酸序列為SEQ ID NO.1的麥芽四糖淀粉酶基因連接到表達載體上，然后在轉化到枯草芽孢桿菌中，篩選正確的轉化子，即得到基因工程菌。

5.如權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述轉化是通過化學轉化法進行的。

6.一種生產麥芽四糖淀粉酶的方法，其特征在于，所述方法是應用權利要求1-3任一所述的基因工程菌進行發酵。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法是將種子培養液接入發酵罐，以25-35％氨水控制pH6.5-7.5，培養溫度33-37℃。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，發酵時將溶氧維持在30-50％，當溶氧迅速上升時，開始流加補料培養基，當麥芽四糖淀粉酶酶活開始下降時結束培養。

9.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述補料培養基(g/L)為：葡萄糖240-260，工業蛋白胨170-190，豆粕粉65-75，微量元素液TES 18-23mL；微量元素液TES(g/L)：CaCl₂0.5，ZnSO₄·7H₂O 0.18，MnSO₄·H₂O 0.1，Na₂-EDTA 10.05，FeCl₃ 8.35，CuSO₄·5H₂O0.16，CoCl₂·6H₂O 0.18，所述工業蛋白胨與豆粕粉的質量比為2-3:1。