[發明專利]一種超低粘附包被液的制備及應用

在審

• 申請號: 201910407128.2
• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110106136A
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 王春香;劉勇
• 申請（專利權）人: 江蘇康為世紀生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 南京常青藤知識產權代理有限公司 32286
• 代理人: 金迪

本發明提供一種超低粘附包被液的制備及應用，涉及生物技術領域，包括如下步驟：S1.將3?5g瓊脂糖加入到100mL去離子水中，制得濃度為3?5％的瓊脂糖溶液，進行高壓滅菌；S2.將步驟S1中高壓滅菌后的瓊脂糖溶液冷卻至45?50℃，按瓊脂糖溶液體積：二甲基亞砜體積＝1：3的比例，邊攪拌邊向瓊脂糖溶液中緩慢加入二甲基亞砜，使瓊脂糖溶液的終濃度為0.75?1.25％；S3.將步驟S2得到的瓊脂糖溶液進行高壓滅菌，滅菌后冷卻至室溫備用。本發明方法簡單，便于操作，可增加實驗結果準確性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，本發明涉及一種超低粘附包被液的制備及應用。

背景技術

三維細胞培養是目前最接近體內環境的細胞模型。運用三維技術培養腫瘤細胞，可以形成由不同表型細胞構成的類似腫瘤組織，并且腫瘤細胞在發生侵襲、轉移的能力以及對藥物的反應等方面也與體內具有較高的一致性。采用低粘附培養板使細胞保持懸浮生長是三維細胞培養的一種方法，但現有的成品超低粘附三維培養板大多是在固定規格的培養板上噴涂一層抑制細胞粘附的物質，難以滿足不同的實驗需求，無法將抑制細胞粘附的物質應用到適當使用規格的培養板上，操作不便。

因此，急需一種方法簡單，便于操作，可增加實驗結果準確性的超低粘附包被液的制備及應用。

發明內容

為了解決現有超低粘附包被液的制備及應用的問題，本發明提供一種超低粘附包被液的制備及應用。

本發明提供了如下的技術方案：

一種超低粘附包被液的制備，包括如下步驟：

S1.將3-5g瓊脂糖加入到100mL去離子水中，制得濃度為3-5％的瓊脂糖溶液，進行高壓滅菌；

S2.將步驟S1中高壓滅菌后的瓊脂糖溶液冷卻至45-55℃，按瓊脂糖溶液體積：二甲基亞砜體積＝1：3的比例，邊攪拌邊向瓊脂糖溶液中緩慢加入二甲基亞砜，使瓊脂糖溶液的終濃度為0.75-1.25％；

S3.將步驟S2得到的瓊脂糖溶液進行高壓滅菌，滅菌后冷卻至室溫備用。

優選的,步驟S1中將4g瓊脂糖加入100mL去離子水中，制得濃度為4％的瓊脂糖溶液，在溫度121℃、蒸氣壓103.4kPa的條件下高壓滅菌30min。

優選的,取100mL步驟S2中4％的瓊脂糖溶液冷卻至50℃，邊攪拌邊緩慢加入300mL二甲基亞砜，使瓊脂糖溶液的終濃度為1.00％。

優選的,取400mL步驟S3中的瓊脂糖溶液，在溫度121℃、蒸氣壓103.4kPa的條件下高壓滅菌30min。

本發明的有益效果是：本發明是基于瓊脂糖采用特殊工藝制備超低粘附包被液。瓊脂糖是由1,3連結的β-D-半乳糖和1,4連結的3,6-內醚-L-半乳糖交替連接起來的長鏈，為不帶電荷的中性物質，瓊脂糖對細胞無毒害作用，對細胞沒有粘附能力，不影響細胞的三維生長，經過本包被液包被的培養板或培養皿，培養的細胞均可保持懸浮狀態，便于操作；本方法制得的包被液無色透明，具有良好的透光性能，不影響后續顯微鏡觀察以及酶標儀測得的吸光度值，增加實驗結果的準確度；可以根據不同的實驗需求，使用該包被液制備超低粘附培養板或培養皿，制備方法簡單，使用方便。

附圖說明

附圖用來提供對本發明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本發明的實施例一起用于解釋本發明，并不構成對本發明的限制。在附圖中：

圖1是經超低粘附包被液包被96孔的細胞培養板和未經超低粘附包被液包被的96孔細胞培養板的吸光度(OD)值；

圖2是人回盲腸癌細胞HCT-8在未經超低粘附包被液包被的細胞培養板和經超低粘附包被液包被的細胞培養板中培養時的細胞懸浮率；