[發明專利]一種肼的零背景熒光檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 201910406958.3
• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110261353A
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 張鵬;郭心潔;公艷;張倩;丁彩鳳
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王鵬

本發明公開了一種肼的零背景熒光檢測方法及其應用，本發明通過十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)膠束促進4?二乙氨基水楊醛與肼之間的縮合反應，原位生成的具有分子內氫鍵的熒光物質作為肼的指示劑，提出了一種肼檢測的新方法。該方法構建了零背景的檢測模式，并避免了實驗期間繁瑣的有機合成和有機溶劑的使用。此外，在實際水樣、血清樣本，活細胞甚至小鼠成像在內的廣泛研究表明，探針4?二乙氨基水楊醛(DEASA)和原位傳感方案在靈敏度、抗干擾能力和成像方面具有良好的穩定性和廣泛的應用前景。

技術領域

本發明屬于肼檢測技術領域，涉及一種用于檢測肼的方法策略。更具體地，涉及一種肼的零背景熒光檢測方法及其應用。

背景技術

眾所周知，肼是一種廣泛使用的火箭推進劑，由于其固有的強堿性和還原性，在工業領域中應用廣泛，主要用于制造化學催化劑，醫藥中間體和農用化學品。然而，世界衛生組織將肼定義為生產和運輸過程中的具有劇毒性和致癌性的環境污染物，并且閾值限值定為10ppb。此外，肼的水溶性極佳，易通過口腔和皮膚接觸吸收，對腎臟、肺臟、肝臟甚至中樞神經系統等人體器官造成嚴重的損害。因此，對于肼的檢測，監測其痕量濃度是十分重要的，從而滿足在水溶液中高靈敏度和具有良好傳感性能的需求。

目前，肼的檢測的常用分析方法主要有電化學分析、HPLC/GS-MS方法和毛細管電泳，但這些方法通常需要在高成本的實驗儀器上進行，樣品制備繁瑣，并且與熒光探針相比，不適用于生物系統中的分析。

熒光探針作為一種在對目標物的傳感中具有特殊光學特性的化合物，其能夠滿足日益增長的解決環境污染和人類健康問題的需求，并且熒光探針在靈敏度和選擇性方面取得了很大進步。迄今已開發出一系列適用于實際樣品、活細胞甚至生物體的熒光探針，這些探針簡單易行，可用于標記或生物成像，使它們在疾病的早期診斷和環境污染檢測方面具有巨大潛力。

此外，為了提高熒光探針的分析靈敏度和信噪比，雖然目前文獻報道中，已經有多種方法設計和構建分子結構來提高響應信號或減少背景干擾。例如，通過扭曲的分子內電荷轉移(TICT)、熒光共振能量轉移(FRET)和光致電子轉移(PET)等光物理過程設計探針結構。但是使用探針和分析物原位生成發色團的分析方法可以完全避免背景熒光的干擾，并且該類探針通常具有巧妙的分子結構，其本身是不發光的，與分析物結合可自行產生發光體實現對分析物的檢測，以及簡單的分子結構可有效地避免繁瑣的合成及純化過程，其是目前比較具有應用價值的水中肼檢測方法，通過探針和目標分析物之間的特定反應生成發色團的分析方法，為實現目標物的高靈敏度零背景檢測提供了一種新思路。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是針對現有技術中存在的問題，提供一種CTAB膠束促進4-二乙氨基水楊醛與肼的縮合反應，原位生成的發色團作為肼檢測指示劑的新型傳感策略。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種肼的零背景熒光檢測方法，通過十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)膠束促進4-二乙氨基水楊醛與分析物肼之間的縮合反應，原位生成的具有分子內氫鍵的新生色團作為肼檢測的指示劑。

本發明通過4-二乙氨基水楊醛(DEASA)在CTAB膠束中與肼的縮合反應，原位生成的新生色團作為肼檢測的熒光指示劑，實現了水相中肼的零背景檢測，避免了繁瑣的有機合成及有機溶劑的使用。

上述公開的具體檢測方法，包括如下步驟：

步驟一：在比色管中加入PBS緩沖液作為溶劑；

步驟二：向步驟一的溶劑中加入探針DEASA和特定濃度的CTAB。

步驟三：向步驟二的溶液中加入分析物肼，DEASA與肼發生縮合反應，生成發光物質HDBM。

需要說明的是，上述縮合反應的反應溫度為室溫，反應迅速。

優選的，所述新生色團的合成方法具體包括如下步驟：