[發(fā)明專利]一種肼的零背景熒光檢測方法及其應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110261353A
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張鵬;郭心潔;公艷;張倩;丁彩鳳
• 申請（專利權(quán)）人: 青島科技大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王鵬

本發(fā)明公開了一種肼的零背景熒光檢測方法及其應(yīng)用，本發(fā)明通過十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)膠束促進(jìn)4?二乙氨基水楊醛與肼之間的縮合反應(yīng)，原位生成的具有分子內(nèi)氫鍵的熒光物質(zhì)作為肼的指示劑，提出了一種肼檢測的新方法。該方法構(gòu)建了零背景的檢測模式，并避免了實驗期間繁瑣的有機合成和有機溶劑的使用。此外，在實際水樣、血清樣本，活細(xì)胞甚至小鼠成像在內(nèi)的廣泛研究表明，探針4?二乙氨基水楊醛(DEASA)和原位傳感方案在靈敏度、抗干擾能力和成像方面具有良好的穩(wěn)定性和廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于肼檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于檢測肼的方法策略。更具體地，涉及一種肼的零背景熒光檢測方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

眾所周知，肼是一種廣泛使用的火箭推進(jìn)劑，由于其固有的強堿性和還原性，在工業(yè)領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛，主要用于制造化學(xué)催化劑，醫(yī)藥中間體和農(nóng)用化學(xué)品。然而，世界衛(wèi)生組織將肼定義為生產(chǎn)和運輸過程中的具有劇毒性和致癌性的環(huán)境污染物，并且閾值限值定為10ppb。此外，肼的水溶性極佳，易通過口腔和皮膚接觸吸收，對腎臟、肺臟、肝臟甚至中樞神經(jīng)系統(tǒng)等人體器官造成嚴(yán)重的損害。因此，對于肼的檢測，監(jiān)測其痕量濃度是十分重要的，從而滿足在水溶液中高靈敏度和具有良好傳感性能的需求。

目前，肼的檢測的常用分析方法主要有電化學(xué)分析、HPLC/GS-MS方法和毛細(xì)管電泳，但這些方法通常需要在高成本的實驗儀器上進(jìn)行，樣品制備繁瑣，并且與熒光探針相比，不適用于生物系統(tǒng)中的分析。

熒光探針作為一種在對目標(biāo)物的傳感中具有特殊光學(xué)特性的化合物，其能夠滿足日益增長的解決環(huán)境污染和人類健康問題的需求，并且熒光探針在靈敏度和選擇性方面取得了很大進(jìn)步。迄今已開發(fā)出一系列適用于實際樣品、活細(xì)胞甚至生物體的熒光探針，這些探針簡單易行，可用于標(biāo)記或生物成像，使它們在疾病的早期診斷和環(huán)境污染檢測方面具有巨大潛力。

此外，為了提高熒光探針的分析靈敏度和信噪比，雖然目前文獻(xiàn)報道中，已經(jīng)有多種方法設(shè)計和構(gòu)建分子結(jié)構(gòu)來提高響應(yīng)信號或減少背景干擾。例如，通過扭曲的分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移(TICT)、熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)和光致電子轉(zhuǎn)移(PET)等光物理過程設(shè)計探針結(jié)構(gòu)。但是使用探針和分析物原位生成發(fā)色團的分析方法可以完全避免背景熒光的干擾，并且該類探針通常具有巧妙的分子結(jié)構(gòu)，其本身是不發(fā)光的，與分析物結(jié)合可自行產(chǎn)生發(fā)光體實現(xiàn)對分析物的檢測，以及簡單的分子結(jié)構(gòu)可有效地避免繁瑣的合成及純化過程，其是目前比較具有應(yīng)用價值的水中肼檢測方法，通過探針和目標(biāo)分析物之間的特定反應(yīng)生成發(fā)色團的分析方法，為實現(xiàn)目標(biāo)物的高靈敏度零背景檢測提供了一種新思路。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提供一種CTAB膠束促進(jìn)4-二乙氨基水楊醛與肼的縮合反應(yīng)，原位生成的發(fā)色團作為肼檢測指示劑的新型傳感策略。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種肼的零背景熒光檢測方法，通過十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)膠束促進(jìn)4-二乙氨基水楊醛與分析物肼之間的縮合反應(yīng)，原位生成的具有分子內(nèi)氫鍵的新生色團作為肼檢測的指示劑。

本發(fā)明通過4-二乙氨基水楊醛(DEASA)在CTAB膠束中與肼的縮合反應(yīng)，原位生成的新生色團作為肼檢測的熒光指示劑，實現(xiàn)了水相中肼的零背景檢測，避免了繁瑣的有機合成及有機溶劑的使用。

上述公開的具體檢測方法，包括如下步驟：

步驟一：在比色管中加入PBS緩沖液作為溶劑；

步驟二：向步驟一的溶劑中加入探針DEASA和特定濃度的CTAB。

步驟三：向步驟二的溶液中加入分析物肼，DEASA與肼發(fā)生縮合反應(yīng)，生成發(fā)光物質(zhì)HDBM。

需要說明的是，上述縮合反應(yīng)的反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)迅速。

優(yōu)選的，所述新生色團的合成方法具體包括如下步驟：