[發明專利]一種抗腫瘤融合蛋白及其編碼多核苷酸和應用

在審

• 申請號: 201910401151.0
• 申請日: 2019-05-15
• 公開（公告）號: CN110452301A
• 公開（公告）日: 2019-11-15
• 發明（設計）人: 候曉允;潘竹蘭
• 申請（專利權）人: 上海斯霖格生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K38/46;A61K47/64;A61P35/00
• 代理公司: 50213 重慶中之信知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 馬晨博<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發明涉及一種抗腫瘤融合蛋白，該融合蛋白具有結構為D?A?B?C，其中，A為GnRH蛋白元件；B為PEA蛋白的跨膜轉運區；C為DNASE蛋白元件；D為任選的信號肽和/或前導肽序列；“?”表示連接上述各元件的肽鍵；本發明提供的融合蛋白特異性好、細胞毒性低，同時提供了編碼該融合蛋白的多核苷酸，同時還提供了該融合蛋白的應用領域。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，尤其涉及一種抗腫瘤融合蛋白及其編碼多核苷酸和應用。

背景技術

免疫毒素是一組人工構建的具有特異性細胞殺傷能力的雜合分子，由毒性部分、載體部分和靶向部分三部分組成。毒性部分可以是植物、動物、微生物來源的細胞毒素，靶向部分可以是單克隆抗體或細胞因子。免疫毒素與其他抗腫瘤藥物相比，具有毒性強和特異性高的優點，在腫瘤治療中顯示出巨大的應用前景。

凍干重組人促黃體激素釋放激素-綠膿桿菌外毒素A融合蛋白( lyophilizedrecombinant human luteinizing hormone releasing hormone- exotoxin ofpseudomonas aerμginosa fusion protein, 簡稱 LHRH- PE40)是長春基因工程藥物研究生產的一種對腫瘤細胞有特異性殺傷作用的重組毒素。其生產方法為首先采用基因工程的方法將編碼綠膿桿菌外毒素A基因的受體結合區(I區)切除，置換成LHRH基因，再將LHRH-PE40重組基因克隆于質粒中，通過工程發酵表達出LHRH-PE40融合蛋白。

LHRH- PE40中發揮細胞毒作用的是綠膿桿菌外毒素A(exotoxin A ofpseudomonas aerμginosa, PEA)。綠膿桿菌外毒素A是綠膿桿菌中毒力最強的一種毒素，能阻斷細胞蛋白質的合成并引起細胞的凋亡。LHRH-PE40中的導向物為人促黃體激素釋放激素(human luteinizing hormone releasing hormone, LHRH)，通過與其在腫瘤細胞表面的I型受體結合而靶向性地把PEA導入到腫瘤細胞中發揮抗腫瘤作用。

LHRH的受體有兩型，即I型和II型。LHRH與I型受體的親和力很高。人體正常情況下，I型受體主要存在于垂體前葉，垂體外組織如性腺、胎盤和腦組織也含有一定量的I型受體，其它重要器官均不表達I型LHRH受體。然而某些腫瘤細胞表面由于受體異化則分布著大量的LHRH I型受體，包括生殖系統惡性腫瘤、黑色素瘤、胃癌、肝癌、胰腺癌、腸癌、肺癌等。由于I型 LHRH受體在腫瘤細胞中普遍高表達，而在正常組織中只呈局限性分布，因此LHRH是設計重組靶向毒素所需的理想導向物。

LHRH的II型受體廣泛存在于人體各組織中。LHRH與II型受體的親和力很低。但在很高劑量的情況下，LHRH可以和II型受體發生低親和力結合，從而使LHRH-PE40產生廣泛的細胞毒作用。這是LHRH-PE40重組毒素對動物產生毒性作用的理論基礎。LHRH-PE40不能透過血腦屏障，因此不會對垂體產生毒性作用。

盡管以LHRH- PE40為代表的免疫毒素顯示出良好的應用前景,但其仍存在免疫原性和非特異的細胞毒性等問題,阻礙了免疫毒素在臨床上的應用。因此，本領域迫切需要開發特異性好、細胞毒性低的新的免疫毒素。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的不足，提供了一種抗腫瘤融合蛋白，該融合蛋白特異性好、細胞毒性低，同時提供了編碼該融合蛋白的多核苷酸，同時還提供了該融合蛋白的應用領域。

本發明是通過以下技術方案實現：

一種抗腫瘤融合蛋白，具有結構：

D-A-B-C

其中，

A為GnRH蛋白元件；