[發明專利]一種靶向PD-L1的抗體-核酸偶聯藥物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910396266.5
• 申請日: 2019-05-14
• 公開（公告）號: CN110124055B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 張艷;李金波;陳壘;肖瀟
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: A61K47/68
• 分類號: A61K47/68;A61K31/7105;A61P35/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

一種靶向PD?L1的抗體?核酸偶聯藥物及其制備方法和應用，結構如下所示：通過將PD?L1抗體與PD?L1siRNA共價結合、構建新型的抗體?核酸偶聯藥物，以解決可同時靶向腫瘤細胞內及表面的PD?L1藥物缺失的問題，推動腫瘤免疫治療的發展。

技術領域

本發明屬于腫瘤治療領域，具體涉及一種靶向PD-L1的抗體-核酸偶聯藥物及其制備方法和應用。

背景技術

腫瘤細胞通過在其表面表達PD-L1從而逃避T細胞的免疫殺傷。該過程由PD-L1與T細胞表面的程序性細胞死亡蛋白-1(PD-1)之間的相互作用所介導。因而，近年來針對PD-L1與PD-1的藥物研發成為腫瘤免疫治療中的熱門領域。PD-L1與PD-1抗體的研發極大推動了腫瘤的免疫治療，也成為了腫瘤臨床治療中的新型藥物。然而，由于病人對PD-L1抗體治療的有限響應以及不同程度的耐藥，針對PD-L1的持久響應治療一直是該領域中所期待解決的問題。通過對這一問題的分子機制研究，科學家已經發現雖然PD-L1抗體可以有效抑制腫瘤細胞表達的PD-L1，但是腫瘤細胞內部的PD-L1仍然在源源不斷的生成并且會主動地重新分配到細胞膜表面，從而降低了PD-L1抗體治療的療效。因此，新的可以同時靶向腫瘤細胞內及表面的PD-L1藥物亟待開發。

發明內容

解決的技術問題：本發明為了增強腫瘤免疫治療效果，提供一種靶向PD-L1的抗體-核酸偶聯藥物及其制備方法和應用。

技術方案：一種靶向PD-L1的抗體-核酸偶聯藥物，結構如下所示：

上述R1為PD-L1抗體，R2為PD-L1 siRNA。

優選的，上述PD-L1抗體為阿特朱單抗(Atezolizumab)、巴文西亞(Avelumab)或阿斯利康(Durvalumab)。

優選的，上述PD-L1 siRNA為靶向PD-L1基因3’-非翻譯區的小干擾核酸，中間連接基團為光響應斷裂基團；PD-L1 siRNA特征序列為：GUGGCAUCCAAGAUACAAAdTdT；UUUGUAUCUUGGAUGCCACdTdT。

上述靶向PD-L1的抗體-核酸偶聯藥物的制備方法，通過2-亞氨基硫烷鹽酸鹽作為連接基團修飾PD-L1抗體表面的氨基從而引入巰基，再通過巰基-馬來酰亞胺基團特異反應連接帶有末端馬來酰亞胺基團的PD-L1 siRNA與帶有巰基PD-L1抗體從而制備靶向PD-L1的抗體-核酸偶聯藥物

上述靶向PD-L1的抗體-核酸偶聯藥物在制備腫瘤免疫治療產品中的應用。

本發明采用化學方法制備抗體-核酸偶聯藥物并將其應用于增強腫瘤免疫治療。

(一)抗體-核酸偶聯藥物的制備

通過2-亞氨基硫烷鹽酸鹽作為連接基團修飾PD-L1抗體在其表面引入巰基。再通過PD-L1 siRNA末端的馬來酰亞胺基團與PD-L1抗體表面巰基的反應制備靶向PD-L1的抗體-核酸偶聯藥物。

(二)PD-L1 siRNA的靶向運輸

將帶有熒光標記的抗體-核酸偶聯藥物與腫瘤細胞共孵育，通過手提紫外燈誘發PD-L1 siRNA從抗體-核酸偶聯藥物上的分離，并通過共聚焦熒光顯微鏡或者流式細胞分析觀察PD-L1 siRNA的運輸。

(三)抗體-核酸偶聯藥物在腫瘤免疫治療中的應用

將抗體-核酸偶聯藥物與腫瘤細胞共孵育，檢測細胞中PD-L1的表達。隨后，加入外周血單核細胞，通過流式細胞儀檢測腫瘤細胞凋亡。