[發(fā)明專利]一種內(nèi)源性酶觸發(fā)的DNA步行器及其檢測(cè)UDG的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910394437.0
• 申請(qǐng)日: 2019-05-13
• 公開（公告）號(hào): CN110093344B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜瑋;徐曉文;張?zhí)O蘋;張芮源
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/34;G01N21/64
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 王磊

1.一種內(nèi)源性酶觸發(fā)的DNA步行器，其特征是，包括金納米顆粒、至少一條行走鏈和若干軌道鏈，所述行走鏈和軌道鏈均為單鏈DNA，行走鏈的一端與金納米顆粒連接，每條軌道鏈的一端均與金納米顆粒連接，每條軌道鏈的另一端均連接熒光團(tuán)，行走鏈含有第一序列，軌道鏈的含有第二序列，第一序列與第二序列互補(bǔ)，第二序列中的一個(gè)堿基為尿嘧啶堿基；

第一序列的堿基個(gè)數(shù)為數(shù)目為8個(gè)。

2.如權(quán)利要求1所述的DNA步行器，其特征是，行走鏈和軌道鏈均通過Au-S鍵與金納米顆粒連接。

3.如權(quán)利要求1所述的DNA步行器，其特征是，所述金納米顆粒的粒徑為12～14nm；

或，行走鏈和軌道鏈的摩爾比為1:15～25。

4.如權(quán)利要求1所述的DNA步行器，其特征是，行走鏈從5’端至3’端的序列為：TTT TTTTTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT CCT AAG C，

軌道鏈從5’端至3’端的序列為：TTT TTT TTT TGC TUA GGAT。

5.一種權(quán)利要求1～4任一所述DNA步行器在制備檢測(cè)UDG試劑中的應(yīng)用。

6.一種檢測(cè)UDG的生物傳感器，其特征是，包括權(quán)利要求1～5任一所述DNA步行器和脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶。

7.一種檢測(cè)UDG的檢測(cè)試劑盒，其特征是，包括權(quán)利要求1～5任一所述DNA步行器、脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶、1×NEB Cutsmart緩沖液和PBS緩沖液。

8.一種用于非疾病診斷檢測(cè)UDG的方法，其特征是，采用權(quán)利要求1～4任一所述DNA步行器、權(quán)利要求6所述的生物傳感器或權(quán)利要求7所述的檢測(cè)試劑盒，將DNA步行器加入待測(cè)溶液中進(jìn)行孵育，再添加脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶進(jìn)行反應(yīng)，然后進(jìn)行熒光檢測(cè)。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征是，所述孵育溫度為36.5～37.5℃，孵育時(shí)間為1～1.5h；

或，反應(yīng)后進(jìn)行離心，取離心后的上清液進(jìn)行熒光檢測(cè)；

或，熒光檢測(cè)中，激發(fā)波長(zhǎng)為488nm，發(fā)射波長(zhǎng)為520nm。