[發明專利]獲得肝臟細胞的方法和組合物

在審

• 申請號: 201910392377.9
• 申請日: 2019-05-10
• 公開（公告）號: CN111909887A
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 鄧宏魁;時艷;陳思潼
• 申請（專利權）人: 北京大學;北昊干細胞與再生醫學研究院有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張國梁

1.一種用于從多能干細胞誘導產生肝臟細胞的試劑盒或細胞培養基組合物，所述組合物包含下述誘導劑：

(1)Activin A，

(2)BMP信號轉導途徑調節物，

(3)FGF信號轉導途徑調節物，

(4)Wnt信號途徑調節物，

(5)生長因子，

(6)TGFβ受體/ALK5抑制劑。

2.權利要求1所述的試劑盒或細胞培養基組合物，其還包含下述一種或多種誘導劑：

(7)GSK-3β抑制劑，

(8)cAMP激動劑，和/或

(9)核受體配體，

任選地還包含一種或多種另外的誘導劑，如(10)LPA，(11)S1P，和/或(12)XMU-MP-1。

3.權利要求1或2所述的試劑盒或細胞培養基組合物，其中：

所述(2)BMP信號轉導途徑調節物包括BMP蛋白如BMP2、BMP4、BMP7，GDF蛋白如GDF7和抗-BMP受體抗體中的一種或多種；

所述(3)FGF信號轉導途徑調節物包括FGF1、FGF2、FGF4和FGF10中的一種或多種；

所述(4)Wnt信號途徑調節物包括Wnt3a，Wnt激動劑，Dkk，R-Spondin中的一種或多種；

所述(5)生長因子包括KGF、IGF、EGF、VEGF中的一種或多種；和/或

所述(6)TGFβ受體/ALK5抑制劑包括SB431542，LY-364947，SB-505，A-83-01中的一種或多種。

4.權利要求2所述的試劑盒或細胞培養基組合物，其中：

所述(7)GSK-3β抑制劑包括CHIR99021，TD114-2，BIO，Kenpaullone，TWS119，CBM1078，SB216763，3F8(TOCRIS)，AR-A014418，FRATide，Indirubin-3′-oxime，L803中的一種或多種；

所述cAMP激活劑包括Forskolin，IBMX，Rolipram，8BrcAMP，Prostaglandin E2(PGE2)，NKH 477，dibutyryl-cAMP(DBcAMP)，Sp-8-Br-cAMPs中的一種或多種；和/或

所述(9)核受體配體包括雌二醇，全反式視黃酸，13-順式視黃酸，地塞米松，氯倍他索，雄激素，甲狀腺素，曲格列酮，吡格列酮，前列腺素中的一種或多種。

5.權利要求1所述的試劑盒或細胞培養基組合物，其中所述誘導劑以誘導細胞表達標志蛋白AFP、SOX9、Ki67的量存在。

6.權利要求2所述的試劑盒或細胞培養基組合物，其中所述誘導劑以誘導細胞表達標志蛋白AFP和ALB的量存在。

7.一種用于從多能干細胞誘導產生肝臟細胞的方法，所述方法包括使多能干細胞與權利要求1-6任一項所述的試劑盒或細胞培養基組合物接觸以從所述多能干細胞誘導產生肝臟細胞。

8.權利要求7所述的方法，其中將所述多能干細胞與權利要求1所述的試劑盒或細胞培養基組合物接觸，以從所述多能干細胞誘導產生肝母細胞。

9.權利要求8所述的方法，其中將所述肝母細胞進一步與權利要求2所述的誘導劑接觸，以誘導產生肝臟細胞。

10.一種通過權利要求7-9任一項所述的方法得到的肝臟細胞，含有所述肝臟細胞的人工肝裝置和/或所述肝臟細胞用于制備人工肝裝置的用途，例如用于治療肝病，如需要進行細胞灌流的肝病，如肝衰竭，如急性肝衰竭。