[發明專利]抗膠質瘤活性物質吡咯螺酮堿G的制備和用途

有效

• 申請號: 201910391669.0
• 申請日: 2019-05-13
• 公開（公告）號: CN110172485B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 張治針;陳夢宣;宋騰飛;連曉媛
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;A61P35/00;C12R1/80
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

本發明提供一種抗膠質瘤活性物質吡咯螺酮堿G的制備方法，利用已知的一株海洋灰黃青霉菌株ZZ380，通過特定培養方法，提取分離獲得。本發明方法大大提高吡咯螺酮堿G的產量，克服了現有技術在BMPM液體培養基中的產量很低的不足。由于吡咯螺酮堿G具有抗膠質瘤活性強和毒性小的特點，經實驗證明，所述的吡咯螺酮堿G在抑制人膠質瘤細胞增殖方面的效果非常顯著，而且對正常人膠質細胞的毒性小，可與藥學上可接受的載體組成各種劑型的藥物，用于治療膠質瘤。因此，在制備抗膠質瘤藥物方面具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明屬醫藥領域,涉及抗膠質瘤活性物質吡咯螺酮堿G的制備及其醫藥用途。

背景技術

膠質瘤是全球最常見和死亡率最高的腦腫瘤。由于膠質瘤在生物學行為上呈現浸潤性生長，而且多位于腦的重要功能區，要在保證患者腦組織功能完整的情況下將腫瘤完全切除極為困難，所以藥物對膠質瘤的防治顯得極為重要。替莫唑胺是目前臨床上唯一可單獨用于膠質瘤治療的一線藥物(金標藥)。但是包括替莫唑胺和傳統的第一代抗膠質瘤藥物卡莫司汀、洛莫司汀、丙卡巴肼和順鉑等均是細胞毒的烷化劑，具有毒副作用大、耐藥性和療效有限等嚴重不足，而且，新型靶向藥物對膠質瘤的效果也不理想。因此，迫切需要研發新型抗膠質瘤藥物。

海洋特殊的生態環境,使海洋微生物具有與陸地微生物不同的新陳代謝途徑、生存繁殖方式和適應機制,因而產生許多陸地微生物無法產生的化學結構新穎的次級代謝產物。這些代謝物質是發現新型抗腫瘤活性物質或藥物先導化合物的重要資源。

我們前期的研究報道了吡咯螺酮堿G的抗膠質瘤活性(Song et al,Newbioactive pyrrospirones C-I from a marine-derived fungus Penicilliumsp.ZZ380.Tetrahedron,2018,74: 884-891)。吡咯螺酮堿G是從海洋來源的灰黃青霉(Penicillium griseofulvum)菌株ZZ380在 BMPM液體培養基中產生的代謝產物。但是，吡咯螺酮堿G在BMPM液體培養基中的產率很低(0.21μg/mL)。

發明內容

本發明的第一個目的是提供抗膠質瘤活性物質吡咯螺酮堿G的制備，所述的吡咯螺酮堿 G的化學結構式為：

所述的吡咯螺酮堿G的制備，所述的制備方法克服現有技術方法制備吡咯螺酮堿G的不足，大大提高吡咯螺酮堿G的產率，并通過以下步驟實現：

(1)灰黃青霉(Penicillium griseofulvum)ZZ380的菌種：其特征在于，所述的灰黃青霉的菌株保藏于中國典型培養物保藏中心，分類命名為灰黃青霉ZZ380(Penicilliumgriseofulvum ZZ380)，保藏編號CCTCC NO：M 2018344，保藏日2018.06.04，保藏地址：中國-武漢-武漢大學。

(2)灰黃青霉(Penicillium griseofulvum)ZZ380培養物的制備

將灰黃青霉(Penicillium griseofulvum)ZZ380的菌種接種到還有大米培養基的三角燒瓶中，在室溫條件下靜置培養一定時間，得到含有吡咯螺酮堿G的大米培養物。

所述的三角燒瓶為500毫升；所述的每個三角燒瓶的大米培養基的組成為大米40克和 3.5％海鹽水60毫升；所述的室溫條件為20～30℃；所述的培養時間為25～50天。

(3)吡咯螺酮堿G的提取分離

菌株ZZ380的大米培養物用乙酸乙酯提取得到粗提取物。將該粗提取物先用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱層析分離,分別用50％、70％和90％的甲醇洗脫,得到組分I～III,組分III再用制備型高效液相色譜分離純化,得到純化合物吡咯螺酮堿G。