[發明專利]豬神經介素U基因增強子及其應用

有效

• 申請號: 201910386073.1
• 申請日: 2019-05-09
• 公開（公告）號: CN110195058B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 趙要風;王靖;趙毅強;鄒惠影;任立明
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發明提供一種豬神經介素U基因增強子及其應用。本發明提供一種新的豬源的神經介素U基因增強子，利用熒光素酶報告系統發現該增強子能夠在腎源細胞或成纖維細胞中顯著增強啟動子的轉錄活性，為今后制備轉基因豬提供技術支持。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說，涉及一種豬神經介素U基因增強子及其應用。

背景技術

神經介素U,(neuromedin U,NMU)是神經介素多肽家族中的一員,于1985年首次從豬的脊髓中發現并分離提純,在人類和其他哺乳動物中都有分布。神經介素U具有多種廣泛性的功能,能夠控制平滑肌收縮,調節血壓,控制食欲,影響骨骼生長等多種功能(Malendowicz,Nussdorfer et al.1994,Hanada,Teranishi et al.2004)。小鼠中的研究表明,NMU敲除的小鼠與正常對照組比較,表現出了明顯的肥胖癥狀(Hanada, Teranishiet al.2004)。

目前的已有的研究并沒有對該基因增強子元件以及相關能夠影響活性的突變的報道。而通過對于該基因的增強子以及相關突變的研究可以增加人們對于該基因調控機制的了解，更可以根據為人們有目的的調控該基因的表達量提供手段。通過對于相關突變位點進行單堿基的替換，可以在不影響基因整體結構的情況下實現對于該基因表達量的精確調控，并減少可能引起的副作用。此外，由于該基因可以通過影響體脂率進而影響瘦肉含量，因此可以在育種過程中，對該增強子元件對應的突變進行選擇，成為豬種改善肉質的選擇位點。最后，由于豬種在生理特征、器官形態、代謝機制等方面上比小鼠更接近人類。豬種更適合作為模型動物用于對于人類肥胖和代謝疾病的。因此，在豬中以該增強子元件為基礎進行基因修飾，可以為肥胖疾病的模式動物的構建提供理論基礎。

綜上，NMU基因是潛在的代謝行疾病(如肥胖癥、2型糖尿病等)重要基因靶標之一。NMU的表達量能夠直接影響個體的代謝，而目前尚未見對該基因增加子元件的相關研究。同時，該基因也是豬育種過程中決定脂肪繁殖等相關性狀的重要候選位點。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬神經介素U基因增強子及其應用。

為了實現本發明目的，第一方面，本發明提供一種豬神經介素U基因增強子，所述增強子為：

i)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

ii)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列經取代、缺失和/或增加一個或多個核苷酸且具有增強啟動子轉錄活性的核苷酸序列；

iii)在嚴格條件下與SEQ ID NO:1所示序列雜交且具有增強啟動子轉錄活性的核苷酸序列，所述嚴格條件為在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜；或

iv)與i)、ii)或iii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且具有增強啟動子轉錄活性的核苷酸序列。

第二方面，本發明提供含有所述增強子的生物材料，所述生物材料包括聚核苷酸、重組DNA、表達盒、轉座子、質粒載體、噬菌體載體、病毒載體或工程菌。

進一步地，本發明提供含有所述增強子的重組質粒，將所述增強子構建到載體pGL3-Promoter的NheⅠ和BglⅡ酶切位點之間構建得到的。

第三方面，本發明提供所述增強子在增強啟動子轉錄活性中的應用。

第四方面，本發明提供所述增強子在增強豬神經介素U基因轉錄活性中的應用。

第五方面，本發明提供所述增強子在腎源細胞(如IBRS-2)或成纖維細胞中增強啟動子轉錄活性中的應用。

優選地，將上述構建的重組質粒轉入腎源細胞或成纖維細胞中。

可選地，所述腎源細胞或成纖維細胞來自豬。