[發(fā)明專利]β-D-葡萄糖苷酶基因及其編碼蛋白

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910385276.9
• 申請日: 2019-05-09
• 公開（公告）號: CN110066814B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧友光;黃曉宇
• 申請（專利權(quán)）人: 福建醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N9/42
• 代理公司: 福州君誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

本發(fā)明公開了β?D?葡萄糖苷酶基因及其編碼蛋白，所述β?D?葡萄糖苷酶基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，該β?D?葡萄糖苷酶基因的編碼蛋白具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本發(fā)明的β?D?葡萄糖苷酶，在偏酸性的pH條件下，具有良好的穩(wěn)定性和活性，具有在極端環(huán)境下應(yīng)用的潛力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物基因領(lǐng)域，具體涉及一種β-D-葡萄糖苷酶基因及其編碼蛋白。

背景技術(shù)

β-葡萄糖苷酶(β-D-Glucosidase，EC3.2.1.21)，又稱β-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶，別名龍膽二糖酶、纖維二糖酶(cellobias，CB或β-G)和苦杏仁苷酶。它屬于纖維素酶類，是纖維素分解酶系中的重要組成成分，能夠水解結(jié)合于末端非還原性的β-D-葡萄糖鍵，同時釋放出β-D-葡萄糖和相應(yīng)的配基。該酶在自然界中的分布廣泛，在植物的種子和微生物中尤為普遍，在動物和真菌體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)該酶的存在，微生物來源的報道較多。

β-葡萄糖苷酶的主要功能為水解葡萄糖苷鍵，釋放出葡萄糖作為產(chǎn)物，是生物體糖代謝途徑中不可或缺的一類酶。該酶在人類社會的生產(chǎn)和生活中，具有多方面的實際應(yīng)用價值，例如在生物能源領(lǐng)域，它可以用于降解纖維素，產(chǎn)生葡萄糖；在食品領(lǐng)域，它可以在釀酒時提高酒香，制茶時增加茶葉的香味；在工業(yè)領(lǐng)域，它可以大量生產(chǎn)大豆異黃酮苷元產(chǎn)品；在醫(yī)藥領(lǐng)域，其濃度可以作為腸損傷的早期生化指標(biāo)，同時β-葡萄糖苷酶的底物特異性、轉(zhuǎn)糖苷功能和葡萄糖耐受性等也備受關(guān)注。

β-葡萄糖苷酶在使用過程中，反應(yīng)體系處于pH偏酸性的條件下時，不耐酸的β-D-葡萄糖苷酶會迅速喪失活性，導(dǎo)致催化反應(yīng)速率下降，而耐酸的β-D- 葡萄糖苷酶則會展現(xiàn)出良好的效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種β-D-葡萄糖苷酶基因及其編碼蛋白。

本發(fā)明所提供的β-D-葡萄糖苷酶基因，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發(fā)明還提供了上述β-D-葡萄糖苷酶基因所編碼的蛋白,所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本發(fā)明所述β-D-葡萄糖苷酶基因，是從10份不同來源的牙菌斑混合物中，通過宏基因組學(xué)技術(shù)，使用試劑盒提取宏基因組DNA，并直接對提取好的宏基因組DNA進行PCR擴增得到。

本發(fā)明β-D-葡萄糖苷酶基因編碼的β-D-葡萄糖苷酶具有良好的耐酸性，在偏酸性(pH為3.0左右)條件下依然持有較高的活性，穩(wěn)定性好，擴展了其應(yīng)用范圍。

附圖說明

圖1為實施例1步驟1中PCR產(chǎn)物的電泳圖譜。

圖2為實施例1步驟4中重組質(zhì)粒圖譜。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明做進一步說明。以下未注明具體條件的實驗方法，按照本領(lǐng)域常規(guī)實驗條件或者制造廠商所建議的條件。

本發(fā)明所述β-D-葡萄糖苷酶基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

上述β-D-葡萄糖苷酶基因的編碼蛋白序列如SEQ ID NO.2所示。

本發(fā)明所述β-D-葡萄糖苷酶基因的來源，是從10份不同來源的牙面上的牙菌斑混合物中，通過宏基因組學(xué)技術(shù)，使用試劑盒(Mobio牌，Power DNA Isolation Kit，14900-50-NF，USA)提取宏基因組DNA，并直接對提取好的宏基因組DNA進行PCR擴增得到。

實施例1

通過分子克隆技術(shù)，構(gòu)建β-D-葡萄糖苷酶基因的蛋白表達(dá)載體

1、對提取好的宏基因組DNA做PCR擴增(50μl體系)