[發(fā)明專利]基因FGL1在制備結(jié)直腸癌和肺癌診斷試劑盒的應(yīng)用及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910384511.0
• 申請日: 2019-05-09
• 公開（公告）號: CN110029168B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉相東
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省立醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;G01N33/574
• 代理公司: 51291 成都聚蓉眾享知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 劉艷均

本發(fā)明公開了基因FGL1在制備結(jié)直腸癌和肺癌診斷試劑盒的應(yīng)用，診斷試劑盒包括SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系、用于擴(kuò)增FGL1基因和管家基因的引物對；SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系包括PCR緩沖液、dNTPs、SYBR Green熒光染料。本發(fā)明以FGL1作為檢測診斷的靶點(diǎn)應(yīng)用于臨床制備得到診斷試劑盒，可以對包括結(jié)直腸癌和肺癌在內(nèi)的癌癥進(jìn)行快速診斷和預(yù)測；能夠通過檢測FGL1基因的轉(zhuǎn)錄水平及其表達(dá)情況，可以判斷受試者是否患有癌癥；為疾病的早期診斷和癌癥的治療提供依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種基因FGL1在制備結(jié)直腸癌和肺癌診斷試劑盒的應(yīng)用及試劑盒。

背景技術(shù)

在過去10年中，癌癥研究取得了很大進(jìn)展，包括癌癥機(jī)制，藥物發(fā)現(xiàn)和治療方式。然而，結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，患者的5年生存率仍然很低。由于結(jié)直腸癌經(jīng)常發(fā)生惡性增殖以及淋巴轉(zhuǎn)移，因此很少有患者可以通過手術(shù)完全治愈。因此，結(jié)直腸癌的早期診斷和治療是非常必要的。目前，可預(yù)測預(yù)后的生物標(biāo)志物和常規(guī)臨床病理參數(shù)有限，幾乎沒有有效的治療方案。因此探究結(jié)直腸癌進(jìn)展過程中的關(guān)鍵分子及調(diào)節(jié)通路對指導(dǎo)結(jié)直腸癌早期診治從而降低病死率改善預(yù)后非常重要。

現(xiàn)有技術(shù)中可以得知：纖維蛋白原樣蛋白1、FGL1是纖維蛋白原家族的成員，主要在肝臟中表達(dá)，并首先從人肝細(xì)胞癌中克隆。以前的研究表明，F(xiàn)GL1的表達(dá)在再生肝臟中增加，并且可以刺激原代肝細(xì)胞中3H-胸苷的攝取，這暗示FGL1促進(jìn)肝細(xì)胞增殖。此外，重組FGL1可防止暴發(fā)性肝衰竭大鼠的肝損傷。這些觀察結(jié)果表明FGL1在肝再生和肝臟保護(hù)中起作用。除了在肝臟中的表達(dá)外，還在脂肪組織中報道了FGL1的表達(dá)。FGL1蛋白是機(jī)體自身表達(dá)的蛋白，有免疫調(diào)節(jié)作用。正常情況下，F(xiàn)GL1蛋白表達(dá)局限于正常的肝臟和胰腺組織中。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)中缺少FGL1相關(guān)的基因、標(biāo)志物等與腫瘤或者癌癥的關(guān)聯(lián)，F(xiàn)GL1的表達(dá)在腫瘤形成、遷移、侵襲、逃逸等過程中的機(jī)理作用。

本發(fā)明研究者發(fā)現(xiàn)，在許多實(shí)體瘤中包括肺癌、前列腺癌、黑色素瘤以及乳腺癌都有FGL1蛋白表達(dá)的上調(diào)，肺癌中比例最高。本研究者實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，在很多人類腫瘤組織中，F(xiàn)GL1蛋白的表達(dá)上調(diào)，尤其是非小細(xì)胞肺癌。

由于目前尚無研究調(diào)查結(jié)直腸癌組織中FGL1的表達(dá)，而且FGL1在結(jié)直腸癌中的作用仍不明確。因此，本發(fā)明是根據(jù)本研究者的發(fā)現(xiàn)，提出一種新的用于診斷癌癥的試劑盒，特別是用于診斷肺癌和結(jié)直腸癌。因此以FGL1作為腫瘤治療的潛在藥物靶點(diǎn)和生物標(biāo)志物，在結(jié)直腸癌的診斷和治療過程中具有重要作用。

由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤(hybridoma)抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群，可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。

要制備單克隆抗體需先獲得能合成專一性抗體的單克隆B淋巴細(xì)胞，但這種B淋巴細(xì)胞不能在體外生長。而實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)骨髓瘤細(xì)胞可在體外生長繁殖，應(yīng)用細(xì)胞雜交技術(shù)使骨髓瘤細(xì)胞與免疫的淋巴細(xì)胞二者合二為一，得到雜種的骨髓瘤細(xì)胞。這種雜種細(xì)胞繼承兩種親代細(xì)胞的特性，它既具有B淋巴細(xì)胞合成專一抗體的特性，也有骨髓瘤細(xì)胞能在體外培養(yǎng)增殖永存的特性，用這種來源于單個融合細(xì)胞培養(yǎng)增殖的細(xì)胞群，可制備抗一種抗原決定簇的特異單克隆抗體。

由于單克隆抗體的優(yōu)勢，現(xiàn)有技術(shù)中以蛋白質(zhì)標(biāo)志物作為抗原制備特異性抗體的方法較為成熟。例如在專利CN2018116124820，名稱為一種外泌體腫瘤標(biāo)志物PDL1的快速檢測試劑盒的發(fā)明專利中，其公開了單克隆抗體作為試劑盒的應(yīng)用。

從單克隆抗體的制備過程中可以看出，單克隆抗體的抗體類型主要取決于抗原決定簇。由于高分子蛋白質(zhì)一般具有多個抗原決定簇，因此往往得到的抗體是多種抗原決定簇共同免疫應(yīng)答得到的抗體，抗體的純度往往較低，往往需要經(jīng)過篩選才能給使用。