[發明專利]一種菌株降解藍藻毒素的方法

在審

• 申請號: 201910383602.2
• 申請日: 2019-05-08
• 公開（公告）號: CN110117082A
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 陳道才;陸沙;王懷敏
• 申請（專利權）人: 江蘇納克生物工程有限公司
• 主分類號: C02F3/34
• 分類號: C02F3/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種通過原位分離純化的菌株降解藍藻毒素的方法，將云南滇池底泥作為藻毒素降解菌分離源，再通過底泥稀釋、染毒涂平板、挑取單菌落、劃線純化、MC?LR降解率測試得到MC?LR降解菌。分離所得的氣單孢菌屬菌株對MC?LR最大降解效率達54％，本發明方法實用簡便，效果顯著。

技術領域

本發明涉及一種使用藍藻毒素進行降解的方法，屬于環境技術領域。

背景技術

富營養化是全球范圍內的普遍性環境問題，隨著我國城市化進程不斷加快，工業污染加之農業化肥大量使用，我國水體富營養化問題日漸突出。藍藻水華暴發期間，三分之二水樣中的微囊藻毒素含量超過安全限量；食用污染水體中的水產品，攝入的微囊藻毒素可輕易達到甚至遠遠超過世界衛生組織建議的每日容許攝入量。近年來，藻毒素致毒事件的報道越來越多，在中國，越來越高的肝癌發病率主要是由受藍藻污染的飲用水源引起。目前被鑒定的毒素種類己經超過70種，其中最常見的、毒性最強的是微囊藻毒素-LR(MC-LR)。MC-LR是一種環狀七肽，分子量較小，化學性質穩定，耐酸耐堿，一般加熱煮沸都不能將其有效去除，屬于難降解的生物有機毒素，在自然水體環境中可保留很長時間。

通常MCs的去除方法主要可以分為3類：物理方法、化學方法及生物方法。生物降解作用是藻毒素在自然水體中轉化的主要途徑，就其成本和對環境影響程度而言，生物降解技術較其他藻毒素去除方法具有獨特的優勢。微生物降解是生物降解的主要途徑，同時微生物降解具有較強的專一性，種類繁多的微生物并不適用于降解藻毒素，因此原位分離純化菌株對藻毒素進行降解是行之有效的方法。

發明內容

本發明目的是在于提供一種菌株降解藍藻毒素的方法，方法簡單，特異性強，藻毒素降解效果顯著。

為達到上述目的，本發明采用以下技術方案：

以某水域底泥作為藻毒素降解菌分離源，分離獲得對藻毒素具有高效降解效果的菌株。將泥樣接種于的牛肉膏蛋白脈培養基中，在自然光照、37℃、120rpm條件下進行搖瓶培養兩次，然后平板劃線，觀察菌落生長情況。挑取單菌落，進行多次平板分離純化，在純化過程中逐步提高分離培養基中MCs的濃度進行梯度馴化。經過多次純化后得到純菌株，于4℃冰箱中保存。將分離得到的純菌株接種于基礎培養基中，于37℃、120rpm條件下進行搖瓶培養。定時取樣測定水中MCs的濃度，初步確認分離所得的微生物降解MCs能力的強弱，并選擇其中的優勢菌株做進一步純化。

附圖說明

圖1是菌株對MC-LR的降解曲線

具體實施方式

以下對本發明的技術方案作進一步詳細描述。

本發明是一種適用于藍藻毒素降解細菌的分離純化方法。

本發明所用培養基采用LB液體培養基和LB固體培養基，其中

LB液體培養基：細菌培養用胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，5mol/LNaOH調節pH至7.0(用量約為0.2ml)，用去離子水定容至1000ml，在0.1MPa下蒸汽滅菌30min，備用。

LB固體培養基：在每100ml LB液體培養基加入瓊脂1.3g-1.5g，在0.1MPa下蒸汽滅菌30min，冷卻至約45℃-50℃，倒平板備用。

1.以某底泥作為藻毒素降解菌分離源，吸取1ml底泥至9ml無菌水中，作為10^-1稀釋液；混勾后，再吸取該試管中1ml液體置于9ml無菌水中，作為10^-2稀釋液，依次類推，用梯度稀釋法分別制成10^-3、10^-4、10^-5稀釋液。