[發明專利]一種采用環介導等溫擴增法檢測白血病微小殘留病基因的試劑盒

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• 申請號: 201910382080.4
• 申請日: 2019-05-09
• 公開（公告）號: CN111909985A
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 山東諾信檢測有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種采用環介導等溫擴增法檢測白血病微小殘留病基因的試劑盒。試劑盒包括Bst DNA聚合酶、陽性對照、LAMP反應緩沖液、移液器頭、無菌超純水。本試劑盒是診斷白血病微小殘留病基因的裝備，可實現對人體內殘留白血病細胞的快速檢測，指導白血病的臨床治療。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測領域，具體地說，涉及一種新型核酸擴增技術，方便快捷檢測白血病微小殘留病基因的試劑盒。

背景技術

白血病是造血系統的惡性疾病，是國內十大高發惡性腫瘤之一，發病率為4.7/10萬人口, 其發病率居于中國各類腫瘤第七位，死亡率占各類腫瘤的第六位，是嚴重危害人類健康的惡性腫瘤之一。其中, 急性骨髓性白血病(Acute myeloid leukemia，AML)，是一種骨髓性干細胞異常增殖的血癌，由于干細胞受損，使得白血病細胞增殖、分化、成熟的能力下降，而停滯在細胞發育的不同階段。未成熟細胞在體內無控制性增殖并積累，取代了正常骨髓，導致正常細胞數量減少，骨髓功能喪失。

白血病初診時，患者體內的白血病數量約為10¹²～10¹³。誘導治療緩解后，雖然骨髓常規檢查時顯微鏡下已經看不到白血病細胞了，但患者體內的白血病細胞仍然有10⁸～10⁹，這就是微小殘留白血病（minimal residual disease, MRD），它是白血病復發的根源。研究表明，如果治療后1個月左右MRD能達10⁴以下，今后復發的可能性會非常小。如果MRD到第12周還在10⁴以上，復發的可能性就較大。因此，MRD的監測就顯得尤為重要，主要體現在以下幾個方面：1）指導白血病的臨床治療，根據體內白血病細胞多少以決定是繼續化療抑或停止治療；2）有利于更早地預測白血病的復發；3）有利于較早發現白血病細胞是否耐藥，并依此指導臨床選用更敏感、更具殺傷力的治療措施；4）有助于評價自體造血干細胞移植的凈化效果。

目前檢測MRD的方法較多，例如檢測敏感度依次熒光原位雜交（FISH）10²-10³，流式細胞儀10³-10⁴和聚合酶鏈反應（PCR）10⁴-10⁶等。但無論FISH、流式還是PCR檢測都需要昂貴的設備、較長的檢測時間、檢測成本高、操作復雜。

環介導等溫擴增方法(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)靈敏度高(比傳統的PCR方法高2~5個數量級)，反應時間短(30~60分鐘就能完成反應)，臨床使用不需要特殊的儀器，操作簡單（置于水浴鍋或恒溫箱中63℃左右保溫30~60分鐘，肉眼觀察結果)。

發明內容

本發明涉及一種采用環介導等溫擴增法檢測白血病微小殘留病基因的試劑盒，可實現對人體內殘留白血病細胞的快速檢測，指導白血病的臨床治療。

本發明的試劑盒包括Bst DNA聚合酶、陽性對照、LAMP反應緩沖液、移液器頭、無菌超純水。

附圖說明

圖1為本發明提供的試劑盒的開發過程流程圖。

具體實施方式

實施例1：基因組總RNA提取。

利用商品化的RNA 提取試劑盒( 購自北京天恩澤生物技術有限公司，型號為3701-50)抽提總RNA，室溫操作。具體操作步驟：

（1）將0.2-1.5mL 抗凝全血12000g 離心3分鐘，棄上清。

（2）將1mL 溶液A 加入到血液細胞沉淀中，用移液槍吹打沉淀使細胞裂解。