[發明專利]一種縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法

有效

• 申請號: 201910375981.0
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN110041405B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 江錫銘;丁金國;黃臻輝
• 申請（專利權）人: 上海上藥第一生化藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/20
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;鄒玲

1.一種縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于，其包括如下步驟：采用高效液相反相色譜法將縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液依次進行反相富集、反相轉鹽、反相純化，即可；

所述縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液中縮宮素[5-Asp]雜質的結構式為；

所述的高效液相反相色譜法的填料為超耐水填料；所述超耐水填料為UniSil ODS-AQ超耐水填料；

所述的反相富集、反相轉鹽、反相純化均是在一步反相洗脫過程中完成，所述的反相富集、反相轉鹽、反相純化的條件如下：

其中，流動相A為體積百分比為0.005~0.1%的乙酸/水溶液，流動相B為體積百分比為0.005~0.1%的乙酸/乙腈溶液，樣品C1為所述的縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液，流動相C2為5~50mM NH₄Ac-NH₄OH水溶液，所述的流動相C2的pH為7.0~9.0，洗脫液的流速為80~100ml/min；

收集保留時間為63~67min的洗脫液即得縮宮素[5-Asp]雜質溶液。

2.如權利要求1所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：所述的縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液為固相合成的還原型縮宮素[5-Asp]雜質粗品經溶解、稀釋、氧化而得。

3.如權利要求2所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：所述的還原型縮宮素[5-Asp]雜質粗品經溶解、稀釋得還原型縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液，所述的還原型縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液中還原型縮宮素[5-Asp]雜質粗品的濃度為0.1~4mg/ml；溶解所述還原型縮宮素[5-Asp]雜質粗品的溶劑為體積百分比為50%的乙酸/水溶液。

4.如權利要求3所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：

所述的還原型縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液中還原型縮宮素[5-Asp]雜質粗品的濃度為0.5~2mg/ml。

5.如權利要求1所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：所述縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液中的溶劑為三氟乙酸和乙酸的水溶液。

6.如權利要求1所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：所述超耐水填料的孔徑為7~10nm，粒徑為10μm。

7.如權利要求1所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：所述的高效液相反相色譜法的檢測波長為220nm。

8.如權利要求1所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：所述的流動相A為體積百分比為0.02~0.05%的乙酸/水溶液；

和/或，所述的流動相B為體積百分比為0.02~0.05%的乙酸/乙腈溶液；

和/或，所述的流動相C2為10~20 mM NH₄Ac-NH₄OH水溶液；

和/或，所述的流動相C2的pH為7.5~8.5；

和/或，所述的縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液的HPLC純度為60~85%。

9.如權利要求8所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：所述的縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液的HPLC純度為70%~85%。

10.如權利要求9所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：所述的縮宮素[5-Asp]雜質粗品溶液的HPLC純度為70%~80%。

11.如權利要求1所述的縮宮素[5-Asp]雜質的精制方法，其特征在于：在25~26min期間，將洗脫液由樣品C1完全更換為流動相C2，在35~36min期間，將洗脫液由流動相C2完全更換為流動相A。