[發明專利]一種動脈粥樣硬化易損斑塊小鼠模型的構建方法

有效

• 申請號: 201910375476.6
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN110178792B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 于波;田進偉;郭守利;王雪羽;田江天;符亞紅
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種動脈粥樣硬化易損斑塊小鼠模型的構建方法。該方法是通過雜交的方法獲得具有原纖蛋白1(Fibrillin?1，Fbn1)基因雜合點突變的低密度脂蛋白受體基因(LDLR)敲除小鼠。本發明首次將Fbn1^C1039G+/?點突變引入LDLR^?/?小鼠基因組，結合了兩種基因型的特點，方法簡單易行，能形成具有大脂質核心、大量的炎癥細胞、典型薄纖維帽、豐富的新生血管和斑塊內出血、血管外向重構等特點的易損斑塊，且能模型上觀察到類似于人的斑塊破裂等導致急性心腦血管事件的發生。其成模率高，可重復性好，為藥物研究、器械耗材改進提供良好的動物基礎，為探索動脈粥樣硬化機制提供了良好平臺。

技術領域

本發明涉及一種動脈模型的構建方法，特別涉及一種動脈粥樣硬化易損斑塊小鼠模型的構建方法。本發明屬于生物技術領域。

背景技術

目前，我國心血管病死亡占城鄉居民總死亡原因的首位，心血管病的疾病負擔日漸加重，已成為重大的公共衛生問題。冠心病是心血管疾病中最主要的疾病，動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是冠心病的最主要的病理過程，關于動脈粥樣硬化的研究，成為近年心血管領域的研究熱點。易損斑塊破裂是不良心血管事件發生的首要原因，據報道，有3/4的急性心梗的發生是源于斑塊破裂，但由于動物基因組和人類基因組的差異，以及斑塊形成的病理生理過程不同，使目前動物模型易損斑塊與人類易損斑塊還有很大差異，因此，建立和人類動脈粥樣硬化斑塊相似的動物模型成為目前亟待解決的難題。

關于動脈粥樣硬化的研究主要存在以下幾種方式：1、高脂飲食誘導：由于動物與人基因組的不同，單純飲食誘導動脈粥樣的方式下，鼠、兔等動物不易產生動脈粥樣硬化，僅猴子和豬等與人類基因組高度同源的動物能產生類似于人的斑塊，但這類動物存在花費貴、喂養時間長、操作難度大等問題，成為研究的主要限制。2、血管損傷：通過損傷血管內皮的方式可縮短斑塊形成時間，但其可重復性差，且無法模擬人類斑塊形成的整個病理生理過程。3、基因敲除技術：目前基因敲除技術廣泛用于動脈粥樣硬化的研究中，小鼠由于繁殖速度快，喂養時間短，易操作等優勢成為基因敲除技術應用最多的動物。目前廣泛用于動脈粥樣硬化的基因敲除鼠包括：ApoE^-/-小鼠和LDLR^-/-小鼠等，正常飲食狀態下，ApoE^-/-小鼠也能形成動脈粥樣硬化斑塊，但其動脈粥樣硬化程度輕，而高脂飲食喂養的ApoE^-/-和LDLR^-/-鼠都能形成動脈粥樣硬化斑塊，但其斑塊形成迅速，很難觀察到人類易損斑塊可見的外向重構。基于上述限制，有研究人員利用基因敲除技術構建了ApoE基因敲除犬(公開號為CN106987604)，該方法優點在于保留疾病原發癥狀，疾病表型持續時間長，但由于犬喂養時間長，繁殖慢等問題不利于普遍研究。而公開號為CN101480359A的專利申請所提供的利用液氮凍傷血管的方法建立的易損斑塊模型，不利于研究易損斑塊產生的機制和探索干預辦法。

綜上所述，目前關于動脈粥樣易損斑塊的研究中，缺乏一種符合人類易損斑塊特點的動物模型和建模方法。因此，建立和人類動脈粥樣硬化斑塊相似的動物模型成為目前亟待解決的難題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種動脈粥樣硬化易損斑塊小鼠模型的構建方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

一種動脈粥樣硬化易損斑塊小鼠模型的構建方法，其是通過雜交的方法獲得具有原纖蛋白1(Fibrillin-1，Fbn1)基因雜合點突變的低密度脂蛋白受體基因(LDLR)敲除小鼠。

其中，優選的，所述的原纖蛋白1(Fibrillin-1)基因雜合點突變是指Fbn1^C1039G+/-。

其中，優選的，所述的構建方法包括以下步驟：