[發(fā)明專(zhuān)利]一種重組蕎麥防御素蛋白及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910375066.1
• 申請(qǐng)日: 2019-05-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110128519B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張新瑀;王轉(zhuǎn)花
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/415
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/415;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 太原市科瑞達(dá)專(zhuān)利代理有限公司 14101
• 代理人: 劉寶賢

1.一種重組蕎麥防御素蛋白，其特征在于，所述重組蕎麥防御素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

2.一種DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的序列為編碼權(quán)利要求1所述的重組蕎麥防御素蛋白的核苷酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的核苷酸序列如SEQ IDNO.3或SEQ ID NO.4所示。

4.一種表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體含有至少一個(gè)拷貝的如權(quán)利要求2或3所述的DNA片段。

5.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞含有如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體。

6.一種如權(quán)利要求1所述的重組蕎麥防御素蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)通過(guò)分析蕎麥全基因序列篩選獲得蕎麥防御素蛋白的編碼基因；

2)根據(jù)蕎麥防御素蛋白編碼基因設(shè)計(jì)引物，以全合成的蕎麥防御素蛋白編碼基因?yàn)槟０暹M(jìn)行擴(kuò)增；

3)將步驟2)擴(kuò)增得到的基因片段克隆到表達(dá)載體中，構(gòu)建重組質(zhì)粒；

4)將步驟3)中得到的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，得到重組大腸桿菌，然后對(duì)重組大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)，分離得到重組蕎麥防御素蛋白。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟2)所述引物為SEQ ID NO.5和SEQID NO.6所示的序列。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，步驟3)所述基因片段克隆到載體中連接到BamH I和XhoI克隆位點(diǎn)。

9.如權(quán)利要求1所述的重組蕎麥防御素蛋白、如權(quán)利要求2或3所述的DNA片段、如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體或如權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述真菌為黑曲霉、白腐霉或尖孢鐮刀菌。