[發明專利]靈芝多糖在家畜精液冷凍長期保存中的應用

在審

• 申請號: 201910373913.0
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN109997844A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 李青旺;吳琳;劉定幫
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

本發明公開了一種在家畜精液冷凍保存中應用的保護劑，該保護劑能顯著提高家畜精子的存活率，其主要物質是靈芝多糖。本發明主要創新是在國內外首次將靈芝多糖作為保護劑，用于豬、羊和牛細管冷凍精液長期保存、人工授精及精液超低溫冷凍后的長途運輸后輸精，可顯著提高冷凍?解凍后豬、羊和牛精子活率、頂體完整率和質膜完整率。

技術領域

本發明屬于哺乳動物精液的超低溫冷凍保存技術領域，具體涉及靈芝多糖作為抗凍保護劑在家畜精液冷凍保存中的應用。

背景技術

精子冷凍技術是人工授精的重要革新，不僅解決了雄性動物精液的長期保存問題，便于保存遺傳資源，而且應用方便，不受時間及空間的限制，在開展省際、國際之間畜牧業的協作，在建立全球優良物種基因庫等方面起到重要作用。精子冷凍技術的廣泛應用，有利于提高優秀種公畜的利用率，減少公畜的飼養量，減少經濟成本，提高了畜牧業效益，尤其在人工授精領域方面起到重要的作用。精液冷凍技術對我國及國際的畜牧業可持續發展和畜產品的滿足供應具有重要現實意義。

精子對溫度變化比較敏感，在冷凍降溫的過程中，精子容易遭受冷凍損傷，主要包括物理性損傷、化學性損傷和氧化性損傷。跟新鮮精液相比，冷凍-解凍后的精子，其活率、頂體完整率、線粒體活性、DNA完整率和膜完整率顯著下降。而精子質量的好壞，與妊娠率、分娩率和窩產仔數密切相關。目前為止，冷凍精液人工授精技術已經應用于養牛生產，在奶牛繁殖和改良方面應用最為普及。但冷凍解凍后，依然有40％-50％精子失去活性，嚴重降低了良種公牛的利用率。而豬精子和羊精子對于冷凍刺激更為敏感，解凍后精子復蘇率低，異常精子多，受胎率低于正常受胎率，故豬精子和羊精子冷凍還處于試驗階段。

靈芝是一種重要的中藥材，屬多孔菌科類真菌，靈芝多糖中除含有葡萄糖外，大多還含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、巖藻糖、甘露糖、鼠李糖等單糖多糖的藥理活性與單糖間糖苷鍵的結合形式有關。單糖間以β-1,3、1,6或β-1,4、1,6-糖苷鍵連接是有效的即具有藥理活性，而純β-1,4-糖背鍵連接的則沒有藥理活性。靈芝多糖是靈芝中的一種重要的活性物質，前人研究表明，具有免疫調節、抗腫瘤和抗衰老等生物活性。

由于靈芝多糖具有特有的生理活性和臨床作用，且安全無毒，可廣泛應用于醫藥、食品和化妝品行業?；陟`芝多糖可提高機體免疫力，在癌癥病人經放療、化療機體免疫力受損的情況下，與放療、化療配合可達到治愈疾病的目的。另外，靈芝多糖還可抑制過敏反應介質的釋放，從而阻斷非特異性反應的發生，因此又可抑制手術后癌細胞復發和轉移。已投入使用的靈芝制劑有片劑、針劑、沖劑、口服液、糖漿劑和酒劑等，均取得了一定的臨床療效。靈芝多糖作為功能因子可制成保健食品，也可作為食品添加劑加入飲料、糕點、口服液中，這些都極大地豐富了食品市場。

關于靈芝多糖作為家畜精液冷凍保護劑用于豬、羊和牛等家畜精子冷凍長期保存，甚至任何哺乳類精液冷凍保存的研究，直到目前為止，國內外未查閱到相關報道。所以，本研究通過大量反復試驗和劑量冷凍篩選，發現了靈芝多糖在家畜精液冷凍保護中，特別在豬、羊和牛等家畜精子冷凍保存后，可明顯提高了冷凍后精子活率和膜完整性等。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明提供一種家畜精液冷凍保護劑、以及其在豬、羊和牛精液冷凍保存中的應用，解決了現有技術家畜精子冷凍-解凍后活率較低的問題。

為解決上述不足，本發明采用的技術方案如下：

靈芝多糖在家畜精液冷凍保存中的應用。所述家畜精液冷凍保護劑主要是靈芝多糖。

其次冷凍過程中，需要的常規冷凍基礎液、雞蛋黃和甘油等。特別要強調的是上述的家畜精液冷凍保存劑中添加甘油的量體積比為6％-12％。

以靈芝多糖作為主要冷凍保護劑，冷凍過程中，需要完全溶解于常規冷凍基礎液的配方中(葡萄糖1.1g，檸檬酸1.48g，Tris2.42g，青霉素鈉0.06g，硫酸鏈霉素0.1g，雙蒸水100mL)。