[發明專利]一種登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條、試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201910373384.4
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110007096A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 童國權;楊標;金巍;劉中華;王國強
• 申請（專利權）人: 江蘇碩世生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 徐振興;姚姣陽

1.一種登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法,其特征在于,包括以下步驟：

a.用氯化金溶液和檸檬酸三鈉溶液制備膠體金溶液；

b.碳酸鉀調節步驟a得到的膠體金溶液的pH至6.5-9.0，依次加入登革病毒重組抗原、牛血清白蛋白溶液，離心得到沉淀，重懸液重懸沉淀得到膠體金標記的登革病毒重組抗原溶液；

c.碳酸鉀調節步驟a得到的膠體金溶液的pH至6.5-8.0，依次加入雞IgY抗原、牛血清白蛋白溶液，離心得到沉淀，重懸液重懸沉淀得到膠體金標記的雞IgY抗原溶液；

d. 用結合墊處理液均勻噴涂在結合墊上進行預處理，預處理結束后用步驟b和c得到的膠體金標記的登革病毒重組抗原溶液和膠體金標記的雞IgY抗原溶液的混合溶液對結合墊噴金得到免疫結合墊,噴金結束后將免疫結合墊置于室溫，濕度≤30%條件下干燥1小時，然后在0.1Mpa條件下真空干燥1小時；

e.用包被緩沖液稀釋抗人IgM抗體得到檢測線T1工作液；用包被緩沖液稀釋抗人IgG抗體得到檢測線T2工作液；用包被緩沖液稀釋抗雞IgY多抗得到質控線工作液；用檢測線T1工作液、檢測線T2工作液和質控線工作液分別在貼于37℃-60℃干燥箱中干燥24小時；

f.用樣品墊處理液均勻噴涂在樣品墊上進行預處理；

g.將樣品墊和免疫結合墊貼于劃膜的硝酸纖維素膜下方，將吸水紙貼于劃膜的硝酸纖維素膜的上方得到登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條。

2.根據權利要求1所述的登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟a所述的具體制備步驟為稱取990g水于三角燒瓶中，加入10ml 濃度為2%的氯化金溶液，即溶液中氯化金的終濃度為0.02%，將燒瓶置于磁力攪拌器上加熱至沸騰，迅速加入13ml濃度為2%的檸檬酸三鈉溶液，待溶液變為紅棕色后繼續加熱沸騰5分鐘，靜置至恢復室溫，置于4℃保存待用。

3.根據權利要求1所述的登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟b所述的具體步驟是將膠體金溶液中加入0.2M碳酸鉀，混勻調節pH至6.5-9.0，然后加入登革病毒重組抗原，繼續攪拌30min，再加入2ml 10%牛血清白蛋白溶液，繼續攪拌30min，在4℃、轉速為8000g的條件下離心30min得到沉淀，沉淀用1ml重懸液復溶。

4.根據權利要求1所述的登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟c所述的具體步驟是將膠體金溶液中加入0.2M碳酸鉀，混勻調節pH至6.5-8.0，然后加入雞IgY抗原，繼續攪拌30min，再加入2ml 10%牛血清白蛋白溶液，繼續攪拌30min，在4℃、轉速為8000g的條件下離心30min得到沉淀，沉淀用1ml重懸液復溶。

5.根據權利要求1或3或4所述的登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于：所述重懸液為0.01M磷酸鹽緩沖液，每100ml磷酸鹽緩沖液包含1g牛血清白蛋白和10g海藻糖、0.05% NaN3，pH 7.0±0.1。

6.根據權利要求1所述的登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟d所述的免疫結合墊采用玻璃纖維膜或聚酯纖維膜。

7.根據權利要求1所述的登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟d所述結合墊處理液為硼酸-四硼酸鈉緩沖體系，每100ml結合墊處理液含0.9g 硼酸、0.6g四硼酸鈉、3g海藻糖、3g蔗糖、0.5g BSA、0.5g酪蛋白鈉、10mg 阻斷劑、0.2% Tween80、0.05% NaN3，pH 8.6±0.1。

8.根據權利要求1所述的登革病毒IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟e中，所述的包被緩沖液為Tris緩沖體系，每100ml包被緩沖液含1.21g Tris、0.5g 氯化鈉、3g 蔗糖、0.05% NaN3，pH 8.6±0.1。