[發明專利]一種銅綠假單胞菌顯色培養基及利用其快速檢測的方法

在審

• 申請號: 201910373215.0
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110129406A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發明（設計）人: 蔣曙光;薛亮;曹琥靚;陳李帆;張晨俍;陳昌經
• 申請（專利權）人: 上海源本食品質量檢驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/06;C12R1/385
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種銅綠假單胞菌顯色培養基，其特征在于，包括基礎培養基、顯色底物、抑菌劑，所述顯色底物包括2,3,5-苯基氯化四氮唑；所述抑菌劑包括萘啶酮酸；所述基礎培養基包括碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水。

2.根據權利要求1所述的一種銅綠假單胞菌顯色培養基，其特征在于，所述顯色底物2,3,5-苯基氯化四氮唑的用量為0.1-1.0g/L。

3.根據權利要求1所述的一種銅綠假單胞菌顯色培養基，其特征在于，所述抑菌劑萘啶酮酸的用量為0.01-0.03g/L。

4.根據權利要求1所述的一種銅綠假單胞菌顯色培養基，其特征在于，所述顯色底物還包括4-甲基傘形酮-D-葡萄糖醛酸苷。

5.根據權利要求4所述的一種銅綠假單胞菌顯色培養基，其特征在于，所述4-甲基傘形酮-D-葡萄糖醛酸苷的用量為0-0.1g/L。

6.根據權利要求1所述的一種銅綠假單胞菌顯色培養基，其特征在于，所述碳源的用量為0-40g/L，所述碳源由葡萄糖提供；所述氮源的用量為5-25g/L，所述氮源由蛋白胨和/或酪蛋白提供；所述生長因子由酵母浸膏提供，所述酵母浸膏的用量為2-14g/L；所述無機鹽包括硫酸鉀、氯化鎂，所述硫酸鉀的用量為5-20g/L，所述氯化鎂的用量為1-3g/L；余量為蒸餾水。

7.根據權利要求1所述的一種銅綠假單胞菌顯色培養基，其特征在于，所述抑菌劑還包括有環絲氨酸、牛膽鹽中的一種或多種；所述牛膽鹽的用量為0-1.0g/L；所述環絲氨酸的用量為0-1.0g/L。

8.一種銅綠假單胞菌快速檢測的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟A、配制權利要求書1-7中任意一種銅綠假單胞菌顯色培養基；

步驟B、對待測水源混勻并取樣250mL后得到待測樣品；

步驟C、對待測樣品進行梯度稀釋后得到梯度稀釋待測樣品；

步驟D、用無菌鑷子夾取滅菌過濾膜邊緣部分,粗糙面向上貼放在已滅菌的濾床上,固定好過濾器，對步驟B中的待測樣品或步驟C中的梯度稀釋待測樣品通過過濾膜進行過濾，所述過濾膜的規格為0.45μm；

步驟E、將步驟D中的過濾膜有菌一面向上，無菌貼合于步驟A中制備的銅綠假單胞菌顯色培養基上進行接種，平鋪并避免在濾膜和培養基之間夾留氣泡；

步驟F、將接種完畢的銅綠假單胞菌顯色培養基置于25-42℃的培養箱內24-48h；

步驟G、從培養箱中取出，選取每皿30-300CFU之間的平板計數并計算樣品中銅綠假單胞菌的含量。

9.根據權利要求8所述的一種銅綠假單胞菌快速檢測的方法，其特征在于，所述步驟A具體包括：

步驟a.用電子天平稱取蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、硫酸鉀、氯化鎂；

步驟b.直接加入蒸餾水，稍微加熱使其完全溶解；

步驟c.再加入顯色底物2,3,5-苯基氯化四氮唑、4-甲基傘形酮-D-葡萄糖醛酸苷；加入抗菌素萘啶酮酸，加入環絲氨酸、牛膽鹽中的一種或多種；

步驟d.25℃下混勻后調節pH=5-9；

步驟e.最后加入瓊脂粉10-20g，煮沸使其完全溶解；

步驟f.冷卻至50℃，在超凈工作臺上倒入無菌平板內，凝固后制成銅綠假單胞菌顯色培養基；

步驟g.放置于2-8℃避光環境中保存。

10.根據權利要求8所述的一種銅綠假單胞菌快速檢測的方法，其特征在于，所述步驟C具體包括：

步驟a1.將充分混勻的待測樣品取27.5mL放入247.5mL滅菌生理鹽水中稀釋，充分混勻，制成1:10的梯度稀釋待測樣品；

步驟b1.用滅菌吸管吸取1:10的梯度稀釋待測樣品27.5mL，放入247.5mL滅菌生理鹽水中稀釋，充分混勻，制成1:100的梯度稀釋待測樣品；

步驟c1.另取1mL滅菌吸管，按步驟b1操作順序，制作10倍遞增稀釋待測樣品，每遞增一次換用一支1mL滅菌吸管，制成若干倍數的均勻稀釋液；

步驟d1.取每個倍數的均勻稀釋液250mL進行下一步操作。