[發(fā)明專利]一種基于菌絲球結(jié)構(gòu)調(diào)控的納他霉素合成工藝

在審

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• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN109957590A
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾昕;李峰;曾化偉;徐大勇;張標(biāo);信丙越;李珊珊
• 申請（專利權(quán)）人: 淮北師范大學(xué)
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62;C12R1/465
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責(zé)任公司 34101
• 代理人: 喬恒婷

1.一種基于菌絲球結(jié)構(gòu)調(diào)控的納他霉素合成工藝，其特征在于：

在納他霉素發(fā)酵種子預(yù)培養(yǎng)階段中，利用惰性微粒與產(chǎn)生菌菌絲球之間的碰撞作用，以縮小菌絲球的直徑，降低菌絲球的致密程度，并將以上菌絲球結(jié)構(gòu)受到改造的發(fā)酵種子用于納他霉素發(fā)酵，從而提高納他霉素的生物合成水平。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成工藝，采用分批發(fā)酵的方式，其特征在于包括如下步驟：

步驟1：斜面孢子的培養(yǎng)

將褐黃孢鏈霉菌接種于固體貝塔納培養(yǎng)基斜面上，于29℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)直至產(chǎn)生褐黃色孢子；用接種環(huán)挑取3環(huán)孢子置于裝有60mL液體種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，液體種子培養(yǎng)基中預(yù)添加一定量的惰性微粒，于29℃、220rpm條件下恒溫振蕩培養(yǎng)2天；

步驟2：分批發(fā)酵

在5L發(fā)酵罐中加入3L納他霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，于高溫滅菌鍋中115-121℃滅菌20-30min，其中葡萄糖單獨(dú)滅菌；隨后，以8％的接種量接種步驟1獲得的發(fā)酵種子，于初始pH值7.2、溫度29℃、溶氧保持在30％以上的培養(yǎng)條件下發(fā)酵，直至葡萄糖消耗殆盡；發(fā)酵pH值采用自動流加NaOH溶液的方式控制pH值為7.0直至分批發(fā)酵結(jié)束。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的合成工藝，其特征在于：

步驟1中，所述褐黃孢鏈霉菌為褐黃孢鏈霉菌Z8。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的合成工藝，其特征在于：

步驟1中，所述固體貝塔納培養(yǎng)基的配方以1L計(jì)，包括如下：葡萄糖10g，酵母粉1g，蛋白胨2g，瓊脂20g，pH7.5；所述液體種子培養(yǎng)基的配方以1L計(jì)，包括如下：葡萄糖20g，酵母粉6g，大豆蛋白胨6g，NaCl 5g，pH 7.5。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的合成工藝，其特征在于：

步驟1中，所述惰性微粒為玻璃珠、石英砂或滑石粉。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的合成工藝，其特征在于：

所述玻璃珠的直徑為2mm，所述石英砂的尺寸為40-70目，所述滑石粉的尺寸為6μm。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的合成工藝，其特征在于：

所述玻璃珠的添加比例為5-35個(gè)/30mL，所述石英砂的添加比例為1-7g/L，所述滑石粉的添加比例為1-7g/L。

8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的合成工藝，其特征在于：

所述惰性微粒為滑石粉，添加量為3-4g/L。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的合成工藝，其特征在于：

步驟2中，所述納他霉素發(fā)酵培養(yǎng)基的配方以1L計(jì)，包括如下：葡萄糖80g，酵母粉10g，大豆蛋白胨20g，NaCl 5g，pH 7.5。