[發(fā)明專利]一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇及制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910369655.9
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110082329B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李全發(fā);徐南南;王源秀;師雪芹;王寶娟;高鵬;吳爽;常欣;熊聲麒;楊剛
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽師范大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C12N11/14
• 代理公司: 溫州市品創(chuàng)專利商標(biāo)代理事務(wù)所(普通合伙) 33247
• 代理人: 程春生

1.一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇，其特征是在鉑納米簇外表面包覆有菠蘿蛋白酶；其制備方法包括如下步驟：將菠蘿蛋白酶和氯鉑酸以1：10-1：15摩爾比混合，渦旋器充分混勻5 min，再加入NaOH調(diào)節(jié)pH值為10-13，渦旋器再次混勻5min，緩慢加入NaBH₄至溶液由淡黃色轉(zhuǎn)變?yōu)樽厣粚⑺苽涞臉悠酚?5-65℃水浴6-16 h后，將產(chǎn)物置于1000 Da的透析袋中透析12-24 h，得到菠蘿蛋白酶包裹的鉑納米簇，隨后4℃低溫避光保存。

2.如權(quán)利要求1所述的一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇，其特征是所述的菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇的粒徑在0.6-2.4 nm之間，其熒光最大激發(fā)波長為380 nm，最大發(fā)射波長為460 nm。

3.如權(quán)利要求1所述的一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇，其特征是所述菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇保留原料菠蘿蛋白酶的75-82%的活性。

4.如權(quán)利要求1至3任意之一所述的一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇的制備方法，其特征是包括如下步驟：在2 mL的制備反應(yīng)體系內(nèi)，將菠蘿蛋白酶和氯鉑酸以1：10-1：15摩爾比混合，渦旋器充分混勻5 min，再加入NaOH調(diào)節(jié)pH值為10-13，渦旋器再次混勻5min，緩慢加入NaBH₄至溶液由淡黃色轉(zhuǎn)變?yōu)樽厣粚⑺苽涞臉悠酚?5-65℃水浴6-16 h后，將產(chǎn)物置于1000 Da的透析袋中透析12-24 h，得到菠蘿蛋白酶包裹的鉑納米簇，隨后 4℃低溫避光保存。

5.如權(quán)利要求4所述的一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇的制備方法，其特征是所述菠蘿蛋白酶和氯鉑酸的摩爾比為1：13。

6.如權(quán)利要求4所述的一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇的制備方法，其特征是，加入60 μL的濃度為0.5 M的NaBH₄，水浴溫度為60℃，水浴時間為12 h，pH值為12。

7.如權(quán)利要求1所述的一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇在Fe³⁺檢測中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求7所述的菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇在水中Fe³⁺檢測中的應(yīng)用，其特征是其應(yīng)用于不同環(huán)境水樣中Fe³⁺監(jiān)測，檢測采用熒光比色法，步驟如下：

1）將菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇溶液和不同濃度的Fe³⁺離子溶液混合，在激發(fā)光波長為380 nm的條件下，分別檢測各混合溶液在460 nm的發(fā)射光；繪制納米簇?zé)晒獯銣绯潭扰c不同濃度的Fe³⁺離子之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

2）將菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇溶液和待測水樣進(jìn)行混合，在激發(fā)光波長為380nm的條件下，檢測溶液在460 nm的發(fā)射光；將檢測的此納米簇的熒光信號淬滅強(qiáng)度代入上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算即可。

9.如權(quán)利要求8所述的一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇在水中的Fe³⁺檢測中的應(yīng)用，其檢測Fe³⁺離子的線性范圍為 5μM-1000μM，其檢測限為0.30μM。

10.如權(quán)利要求1所述的一種菠蘿蛋白酶包裹的熒光鉑納米簇在食品、化妝品、醫(yī)藥及治療領(lǐng)域中的應(yīng)用。