[發明專利]一種木薯花粉數量測定方法

在審

• 申請號: 201910368375.6
• 申請日: 2019-05-05
• 公開（公告）號: CN110132822A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發明（設計）人: 何文;李恒銳;張秀芬;楊海霞;劉連軍;黎萍;梁振華;黃珍玲;謝君鋒;韋雪英
• 申請（專利權）人: 廣西南亞熱帶農業科學研究所
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10
• 代理公司: 南寧啟創知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 45122
• 代理人: 謝美萱

本發明公開了一種木薯花粉數量測定方法。先取充分成熟、飽滿、未開裂的10枚木薯花藥，放入2ml離心管中，置于干燥器內于30°培養箱中加速開裂；待花粉完全散出后，加入分散混合液，在渦旋振蕩器上振蕩搖勻成懸浮花粉液；所述分散懸浮混合液由20％偏磷酸鈉，2％蔗糖，2％葡萄糖，0.01％羥丙基甲基纖維素，0.04％～0.06％黃原膠，余量為水組成。再取懸浮花粉液滴在載玻片上，于顯微鏡下觀察統計花粉粒數。本發明克服了由于木薯花粉粒徑大于0.10mm，不能采用血球計數板測定法計數，進行花粉量測定的情況。同時通過選擇合適的分散混合液來提高花粉懸浮液的穩定性，控制花粉的沉降速度，使得采用顯微鏡觀察法測定的時更容易觀察，計數更為準確。

技術領域

本發明屬于木薯檢測技術領域，具體是涉及木薯花粉數量測定方法。

背景技術

花粉量測定的作用：

現有文獻中很多作物進行花粉量測定時，都是通過血球計數板進行，這通常是該物種或者該品種的花粉粒直徑小于0.10mm，可以順利進入血球計數板內，從而可以有效進行花粉量觀察，進而估算出每一枚花藥實際花粉量。但針對木薯花粉量測定文獻報道極少，僅有一篇文章提及木薯花粉量測定時通過血球計數板測定，但是經過申請人反復試驗的實際結果發現木薯花粉卻不能通過虹吸作用進入血球計數板內，導致測定結果與實際花粉量存在明顯差異的情況。其主要原因是：目前接觸到的木薯品種的花粉粒都比較大，通過顯微鏡觀察，發現木薯花粉粒直徑都大于0.10mm，特別是四倍體木薯花粉粒的體積更是明顯大于0.10mm，而血球計數板的高度僅僅是0.10mm，在進行木薯花粉數量測定時，花粉粒無法通過虹吸作用進入血球計數板內，全部被隔離在血球計數板外部邊緣位置，導致在血球計數板內無法觀察到木薯花粉，從未導致不能進行有效的花粉數量測定。

而現有技術中的其他花粉測定方法也并非真正適合木薯花粉測定，其中大部分原因是木薯花粉懸浮液配置的時候出現了問題，木薯花粉懸浮液中木薯花粉懸浮不均勻導致試驗測定結果出現很大的偏差。因此，如何針對木薯花粉粒徑大，花粉懸浮液配置不合理，沉降速度過快，而導致測定結果偏差大，而影響木薯育種研究的問題，做出改進方案的，將對木薯花粉量測定的準確度及提高木薯育種效率具有重要意義。

發明內容

本發明目的是提供一種木薯花粉數量測定方法，其克服了由于木薯花粉粒徑大于0.10mm，無法采用血球計數板測定法進行計數的缺陷。同時通過選擇合適的分散混合液來提高花粉懸浮液的穩定性，控制花粉的沉降速度，使得采用顯微鏡觀察法測定的時更容易觀察，計數更為準確。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：

一種木薯花粉數量測定方法，包括以下步驟：

(3)取充分成熟、飽滿、未開裂的10枚木薯花藥，放入干凈的2ml離心管中，置于干燥器內，于30℃培養箱中加速開裂；

(4)待花粉完全散出后，加入2ml分散混合液，在渦旋振蕩器上振蕩搖勻成懸浮花粉液；所述分散懸浮混合液由20％偏磷酸鈉，2％蔗糖，2％葡萄糖，0.01％羥丙基甲基纖維素，黃原膠：0.04％～0.06％，余量為水組成；

(5)取50ul懸浮花粉液滴在載玻片上，于顯微鏡下統計花粉粒數，重復3次取其平均值；每枚木薯花藥的花粉量＝(花粉粒/花藥)＝(每個載玻片上總花粉粒數×40)÷10；

本發明的有益效果：

(1)本發明針對木薯花粉粒徑大，制備懸浮液狀態不穩定的情況，選擇20％偏磷酸鈉，2％蔗糖，2％葡萄糖，0.01％羥丙基甲基纖維素，0.04％～0.06％黃原膠，來配置木薯花粉穩定的懸浮液，在渦旋振蕩器上振蕩后能在較長時間內使花粉保持穩定懸浮狀態，從而解決每次吸取花粉樣品時，懸浮液狀態不穩定，花粉在重力作用下急速下降，導致的花粉取樣不穩定的狀態。