[發明專利]光周期敏感基因、重組載體、重組細胞、重組體系及其應用

在審

• 申請號: 201910367958.7
• 申請日: 2019-05-05
• 公開（公告）號: CN110129333A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發明（設計）人: 王丕武;金羽琨;王鑫雨;馬義勇;曲靜;關淑艷;張默;宋陽;張卓
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C12N5/10;A01H5/02;A01H6/82
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 任漱晨

1.一種大豆光周期敏感基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.含有所述權利要求1所述光周期敏感基因的重組載體，重組細胞或者重組體系。

3.權利要求1所述光周期敏感基因在延遲植物開花，調整植物生育期的應用。

4.根據權利要求3所述的光周期敏感基因在延遲植物開花，調整植物生育期的應用，其特征在于，所述的應用步驟如下:

將所述大豆光周期敏感基因與第一質粒載體在連接克隆體系中反應，獲得第一重組質粒；

以所述第一重組質粒為模板，在含有預定的擴增引物的擴增體系中進行擴增，獲得目的基因片段；

將第二質粒載體在預定的酶切體系中進行酶切處理2-3h后，在60-68℃條件下限制酶失活，獲得線性化載體；

將所述線性化載與所述目的基因片段混合，在孵育器反應，獲得植物過表達載體；

將所述植物過表達載體通過凍融法轉化農桿菌感受態細胞中，獲得重組細胞；

將所述重組細胞按照預定的方法引入植物體，獲得含有光周期敏感基因的植物體。

5.根據權利要求4所述的應用步驟，其特征在于，所述RT-PCR擴增，擴增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3所示。

6.根據權利要求4所述的應用步驟，其特征在于，所述RT-PCR擴增，擴增條件為：預變性：94℃，5min；變性：94℃，40s；退火：52-62℃，40s；延伸72℃，40s；后延伸72℃，8min；循環數為34個。

7.根據權利要求4所述的應用步驟，其特征在于，所述預定酶切體系具體包括：

限制性內切酶BglⅡ、限制性內切酶BstEⅡ、內切酶緩沖溶液和雙蒸水。

8.根據權利要求4所述的應用步驟，其特征在于，所述以所述第一重組質粒為模板，在含有預定的擴增引物的擴增體系中進行擴增，獲得目的基因片段方法中，預定的擴增引物為如SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。

9.根據權利要求4所述的應用步驟，其特征在于，所述將所述植物過表達載體通過凍融法轉化農桿菌感受態細胞中，獲得重組細胞中，獲得重組細胞的具體方法包括：

將所述植物過表達載體加入到解凍的農桿菌感受態中，冰浴后在液氮中冷凍1-3min，在35-38℃水浴中融化后加入YEP液體培養基，獲得混合細胞懸浮液；

將所述混合細胞懸浮液放置在搖床以轉速為120-150rpm的條件下振蕩2-4h后，在轉速為5000-7000rpm的條件下離心4-7min，獲得懸浮菌液；

將所述懸浮菌液吸出涂于有抗性的YEP固體培養基上，并在26-28℃培養箱中培養24-36h。

10.根據權利要求4所述的應用步驟，其特征在于，所述將所述重組細胞按照預定的方法引入植物體，獲得含有光周期敏感基因的植物體的方法獲得含有光周期敏感基因的植物體方法中預定的方法至少包括浸染法和花粉管道法。