[發明專利]一種CAR-T細胞及其應用

有效

• 申請號: 201910367680.3
• 申請日: 2019-05-05
• 公開（公告）號: CN110343665B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 許天敏;王亮;崔滿華
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/62;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 姜姍姍;趙炳仁

1.一種CAR-T細胞，其特征在于：CAR分子包括依次串聯的引導序列、胞外識別區、鉸鏈區、跨膜區和胞內刺激信號區，所述的胞外識別區為uPA的A鏈上的CD87結合位點，胞外識別區的核苷酸序列為SEQ?ID?No.1；所述的引導序列為CD8α的信號肽、所述的鉸鏈區為CD8α鉸鏈區、所述的跨膜區為CD8α跨膜區，所述的胞內刺激信號區為CD28-CD137-CD3ζ，所述的CAR-T細胞的嵌合抗原受體的核苷酸序列為SEQ?ID?No.2。

2.如權利要求1所述的CAR-T細胞的構建方法，具體步驟如下：

S1、確定第三代嵌合抗原受體的過表達序列：CAR-T細胞的嵌合抗原受體的核苷酸序列為SEQ?ID?No.2，包括信號肽、胞外識別區SEQ?ID?No.1、順次連接的CD8α胞外區50個氨基酸和CD8α跨膜區和CD28-CD137-CD3ζ形成的核苷酸序列SEQ?ID?No.5；

S2、構建慢病毒載體和包裝慢病毒：將所述的嵌合抗原受體的核苷酸序列SEQ?ID?No.2連接于過表達慢病毒主質粒上，經過酶切鑒定步驟確定過表達片段的準確性，將慢病毒主質粒配合病毒包裝輔助質粒對293T細胞使用轉染試劑進行共轉染，經過細胞培養和上清液濃縮得到慢病毒顆粒，最后檢測滴度后保存于-80℃超低溫冰箱，半年內使用；

S3、T細胞的分離和擴增培養：收集健康成年人外周靜脈血，從中分離出T細胞進行擴增培養；采用步驟S2中制得的慢病毒對上述培養得到的T細胞進行轉染并擴增培養，獲得CD87-CAR-T細胞。

3.如權利要求1所述的CAR-T細胞在制備治療CD87陽性的惡性腫瘤藥物中的應用，其特征在于：所述的CD87陽性的惡性腫瘤為卵巢癌。