[發明專利]磁珠法FFPE組織中DNA提取方法

在審

• 申請號: 201910367598.0
• 申請日: 2019-05-05
• 公開（公告）號: CN109957563A
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 高伙妮;金安娜;龔偉;卞珍;張志帥;包文靜
• 申請（專利權）人: 上海睿璟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種磁珠法FFPE組織中DNA提取方法，其特征在于：使用試劑盒提取DNA的實驗流程如下：

1)取樣：每個樣本選取1～3張未染色5-10μm厚FFPE切片，置于干凈的紙巾上，另取干凈1.5mL離心管，并標記好樣本名或編號；

2)先用移液器取200μL脫蠟液加入到離心管中，將刮取組織的刀片在離心管中浸濕；

3)用刀片從切片上刮下石蠟包埋的組織，轉移至離心管中，再取200μL脫蠟液沖洗刀片上殘留組織樣本至離心管中，渦旋混勻20s；

4)短暫離心，置于恒溫混勻儀上56℃孵育5min，再渦旋混勻20s；

5)短暫離心，加入20μL蛋白酶K，蓋好管蓋上下顛倒混勻，加入200μL裂解消化液，渦旋混勻10s；

6)短暫離心，置于恒溫混勻儀上56℃，800rpm振蕩孵育2小時，再90℃孵育60min；

7)從冰箱取出磁珠室溫平衡30min；

8)孵育完的組織短暫離心，取下層消化液轉移至新的1.5mL離心管，并標記好樣本名或編號；

9)消化液中加入300μL結合液和20μL磁珠至樣本中，渦旋混勻20s，短暫離心，室溫孵育5min，期間顛倒混勻數次；

10)將樣本轉移至磁力架上吸附2min，吸棄上清液；

11)加入500μL漂洗液1，渦旋混勻15s重懸磁珠，將樣本轉移至磁力架上吸附2min，吸棄上清液；

12)加入500μL漂洗液2，渦旋混勻15s重懸磁珠，將樣本轉移至磁力架上吸附2min，吸棄上清液；

13)重復步驟12一次；

14)短暫離心，將樣本管轉移至磁力架上吸附1min，吸棄所有殘余液；

15)打開管蓋，室溫干燥5～10min；

16)加入50μL洗脫液，提前55℃預熱，渦旋打散磁珠；55℃，1500rpm振蕩孵育10min；

17)將樣本管轉移至磁力架上吸附2min，把上清轉移至新的1.5mL離心管中，-80℃保存。