[發(fā)明專利]一種豬偽狂犬病病毒高免血清的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910366836.6
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110105447A
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邢剛;王潔清;岳豐雄;方芳;楊勇;黃杰;袁雪林;魏勝男;李晏齊;王開林;徐祥蘭
• 申請（專利權(quán)）人: 成都天邦生物制品有限公司;馬鞍山史記動物健康管理有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C07K16/06;C07K1/34
• 代理公司: 成都高遠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

一種豬偽狂犬病毒高免血清的制備方法，它是以豬為免疫對象，使用滅活疫苗進行一次基礎(chǔ)免疫和兩次加強免疫，再用豬偽狂犬病病毒進行一次攻毒后，采集血清，即得；所述滅活疫苗含有干擾素α、干擾素β、黃芪多糖和巨噬細胞集落刺激因子的免疫增強劑。本發(fā)明能克服豬來源的高免血清抗體中和能力差的問題，并能廣泛運用于偽狂犬病病毒的JS?2012株、Bartha?k61株、HB?98株、HB2000和/或JS?A1株，具有較好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種豬偽狂犬病病毒高免血清的制備方法。

背景技術(shù)

高免血清，是利用某種疫(菌)苗按一定程序反復(fù)免疫某種動物，并經(jīng)抗體檢測其滴度達到一定水平后，屠宰被免疫動物并收集全血后，經(jīng)特殊處理而制成的一種生物制品。高免血清主要用于生物制品的外源病毒檢驗。

豬偽狂犬病病毒高免血清主要用于獸用生物制品的外源病毒檢驗。隨著豬偽狂犬活疫苗制造工藝的提升，各生產(chǎn)廠家成品疫苗的病毒效價由原來10^5.0TCID₅₀/頭份提升到10^6.0TCID₅₀/頭份以上，因此，需要制備中和效價更高的豬偽狂犬病病毒血清。

目前，大部分豬偽狂犬高免血清采用兔、羊等異源動物，但存在兔體的采集血量較少，羊外源病毒檢測手段困乏、不夠準確說明檢測結(jié)果是否正確等因素的影響。而現(xiàn)有的豬來源的偽狂犬高免血清中和抗體的能力普遍偏弱，無法適用于現(xiàn)今高效價成品疫苗的檢測。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了1.一種豬偽狂犬病毒高免血清的制備方法，其特征在于：它是以豬為免疫對象，使用滅活疫苗進行一次基礎(chǔ)免疫和兩次加強免疫，再用豬偽狂犬病病毒進行一次攻毒后，采集血清，即得；

所述疫苗含有免疫增強劑；

所述免疫增強劑是由0.9％氯化鈉緩沖液中加入干擾素α、干擾素β、黃芪多糖和巨噬細胞集落刺激因子配制成水相后，與吐溫-60混合乳化制得；所述水相和吐溫-60的體積比是(8～10)∶1；

每毫升所述水相含有0.1～100mg干擾素α、0.1～100mg干擾素β、0.1～200mg黃芪多糖和0.1～100mg巨噬細胞集落刺激因子。

如前述的方法，所述水相中含有50mg/ml干擾素α、50mg/ml干擾素β、200mg/ml黃芪多糖和10mg/ml巨噬細胞集落刺激因子。

如前述的方法，所述水相和吐溫-60的體積比是9∶1。

如前述的方法，所述滅活疫苗是使用1體積份的免疫增強劑、49體積份滅活病毒和50體積份弗氏佐劑乳化混合而成。

如前述的方法，所述弗氏佐劑在基礎(chǔ)免疫時為弗氏完全佐劑，加強免疫時為弗氏不完全佐劑。

如前述的方法，所述豬偽狂犬病病毒為該病毒的JS-2012株、Bartha-k61株、HB-98株、HB2000和/或JS-A1株。

如前述的方法，所述方法還包括血清純化步驟。

如前述的方法，所述血清純化步驟為：

(1)0.45微米濾器過濾澄清，收集樣品約95ml；

(2)準備純化用緩沖液：緩沖液A、B和C；

(3)用緩沖液A平衡柱體至基線；

(4)上樣，緩沖液A再平衡至基線；

(5)用緩沖液B洗脫至基線，每5ml收集樣本1次，直到洗脫至基線。收集后的樣品中加入1/10體積緩沖液C進行中和。