[發明專利]一種利用α-溶血素納米孔檢測銅離子的方法

在審

• 申請號: 201910365826.0
• 申請日: 2019-05-05
• 公開（公告）號: CN110133065A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發明（設計）人: 郗冬梅;謝貝貝;劉麗萍;房真
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 37236
• 代理人: 單虎

1.一種利用α-溶血素納米孔檢測銅離子的方法，其特征在于，包括：

步驟1：α-溶血素納米孔的組裝；

步驟2：利用上述α-溶血素納米孔檢測不同濃度銅離子樣品，建立信號頻率與銅離子濃度的工作曲線；

步驟3：檢測未知銅離子濃度樣品中銅離子的信號頻率，利用上述工作曲線計算銅離子濃度。

2.根據權利要求1所述的利用α-溶血素納米孔檢測銅離子的方法，其特征在于，所述步驟1具體為：

用貂毛筆在trans檢測池的小孔內外兩側均勻涂抹磷脂溶液；將cis檢測池和trans檢測池組裝后分別加入1M KCl電解質溶液，將一對Ag/AgCl電極浸入電解質溶液中，通過電流放大器探頭向磷脂雙分子層膜兩端施加電壓，使用提拉法在trans池的小孔處形成磷脂雙分子層膜；在cis檢測池中加入α-溶血素，當α-溶血素在磷脂雙分子層膜上自組裝形成一個穩定的納米通道時，離子流將量子化階躍；在+150mV電壓條件下，單個納米孔的穩定開孔電流為150±10pA。

3.根據權利要求1所述的利用α-溶血素納米孔檢測銅離子的方法，其特征在于，所述步驟2具體為：

21)將不同濃度的銅離子溶液分別與DNA探針、還原劑和銅離子螯合劑混合均勻，在30℃下孵育2h；

22)將上述步驟21)的樣品注入cis檢測池，在外加電場+150mV的驅動下，待測物逐一通過α-溶血素納米孔，產生特征性的阻斷電流信號；

23)實時觀測并記錄阻斷電流信號，建立銅離子濃度和阻斷電流信號頻率之間的線性關系。

4.根據權利要求3所述的利用α-溶血素納米孔檢測銅離子的方法，其特征在于，所述步驟21)中，銅離子濃度分別為5μM、1μM、0.1μM、10^-2μM、10^-3μM、10^-4μM。

5.根據權利要求4所述的利用α-溶血素納米孔檢測銅離子的方法，其特征在于，所述DNA探針為C₁₀(5’-CCCCCC(azide)CCCC-3’)和C₆(5’-CCCCCC(alkyne)-3’)，所述C₁₀與C₆的濃度為100μM。

6.根據權利要求5所述的利用α-溶血素納米孔檢測銅離子的方法，其特征在于，所述還原劑為抗壞血酸；所述銅離子螯合劑為三羥丙基三唑甲基胺。

7.根據權利要求6所述的利用α-溶血素納米孔檢測銅離子的方法，其特征在于，所述C₁₀、C₆、三羥丙基三唑甲基胺和抗壞血酸混合后，使用PBS溶液調整液體體積，使得C₁₀、C₆、三羥丙基三唑甲基胺和抗壞血酸的最終濃度分別為10μM、10μM、1mM和1mM。