[發(fā)明專利]一種檢測組織中四環(huán)素的免疫膠體檢測卡

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910365568.6
• 申請日: 2019-05-01
• 公開（公告）號(hào): CN111879953A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜霞;洪霞;袁超
• 申請（專利權(quán)）人: 南京億特生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/94
• 分類號(hào): G01N33/94;G01N33/558;G01N33/52
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.四環(huán)素膠體金檢測卡，其特征在于按照下述步驟制備得到：

(1)膠體金溶液制備：取1 L 三角燒瓶1個(gè)，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸HAuCl₄·3H₂O)5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續(xù)攪拌的情況下加入1%檸檬酸三鈉Na₃C₆H₅O₇·2H₂O溶液5-7 mL，繼續(xù)攪拌加熱，當(dāng)溶液的顏色完全變?yōu)橥该鞯淖霞t色時(shí)，維持5 min后停止加熱，補(bǔ)水至原體積，冷卻至室溫，2-8℃保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)抗體的預(yù)處理：將要標(biāo)記的四環(huán)素抗體在1000 r/min，4℃條件下，離心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/ml，過0.22 μm濾膜；

(3)膠體金標(biāo)記物的制備：取步驟(1)中的膠體金溶液40 mL，用0.25 mol/L K₂CO₃調(diào)節(jié)膠體金溶液pH至 8.5，電磁攪拌器250 r/min攪拌，逐滴加入4 mL 含0.3 mg 抗體蛋白的蛋白溶液，反應(yīng)10 min；逐滴加入4 mL 10% BSA，繼續(xù)攪拌反應(yīng)10 min；金標(biāo)抗體溶液常溫1500 r/min離心10 min，棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；紅色上清溶液4℃，12000 r/min離心20 min，棄上清，收集沉淀，將沉淀用金標(biāo)抗體稀釋液定容至1 mL，制備成四環(huán)素單克隆抗體膠體金標(biāo)記物；

(4)膠體金膜的制備：將步驟(3)四環(huán)素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物用劃膜儀以5 μL/cm的濃度均勻噴在載體玻璃纖維素膜上，室溫自然晾干或者37℃烘干3 h，制成含四環(huán)素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的膠體金膜；

(5)包被膜制備：將羊抗鼠IgG抗體、四環(huán)素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物稀釋成1 mg/mL，用劃膜儀依次以1 μL/cm的濃度噴涂在硝酸纖維素膜上，制備成包被膜，37℃包被2 h后，室溫自然晾干或者37℃烘干；

(6)樣品墊前處理：將樣品墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，在空氣濕度低于60%的條件下，室溫自然晾干；

(7)檢測卡的組裝：PVC膠板自上而下依次粘貼樣品墊、膠體金膜、包被膜和吸水棉，組裝成試紙條，切割成一定寬度的長條，再將試紙條安裝在長條扁平殼狀的檢測卡外殼中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的四環(huán)素膠體金檢測卡，其特征在于所述步驟(5)中所包被的檢測線T設(shè)在質(zhì)控線C的下方；

所述步驟(6)中的樣品墊處理液是由1 g小牛血清蛋白(BSA)和0.8 g氯化鈉(NaCl)，用含有0.5%TRITON-100的0.01 mol/L PBS定容至100 mL。