[發明專利]一種性傳播疾病致病病原的核酸檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201910365375.0
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110257556B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 陳翀;劉華勇;季宇
• 申請（專利權）人: 廣州普世利華科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6893;C12Q1/6888;C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/113;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 單香杰

本發明公開了一種性傳播疾病(Sexually?transmitted?diseases，STD)致病病原的核酸檢測試劑盒。本發明研究得到可基于CRISPR/Cas12a檢測STD相關病原的特異性核酸序列位點，針對該位點可實現STD病原的快遞、靈敏、特異定性檢測，基于該技術構建了STD病原核酸檢測方法和檢測試劑盒，既能實現靶標單分子精準檢測，還能夠實現多位點同時檢測，臨床檢測效果優異，對于STD病原的檢測與篩查具有重要的意義和應用前景。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域。更具體地，涉及一種性傳播疾病致病病原的核酸檢測試劑盒。

背景技術

性傳播疾病(Sexually?Transmitted?Disease,STD)是在全世界范圍內流行的一種最常見的傳染病，其發病、流行與生活方式密切相關，是以性接觸為主要傳播方式的一組疾病。近二十年來性傳播疾病的流行逐漸呈現出流行范圍擴大、罹患年齡減低和嚴重程度加重的態勢，已成為全人類必須共同面對的嚴峻公共健康問題。梅毒、淋病、生殖器皰疹、尖銳濕疣、軟下疳、非淋菌性尿道炎、性病性淋巴肉芽腫和艾滋病8種STD被列為中國重點防治的性病。STD可由病毒、細菌和寄生蟲引起，常見的病原體有幾種：人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency?Virus，HIV)，沙眼衣原體(Chlamydia?trachomatis,CT)，蒼白螺旋體(Treponema?Pallidum，TP)，淋病奈瑟菌(Neisseria?gonorrhoeae，NG)，剛地弓形蟲(Toxoplasma?Gondii，TG)。為實現STD的早期檢測并控制其傳播風險，開發低成本、準確、高效、快速地檢測STD病原的診斷方法非常重要。

常規的病原檢測技術如(1)分離培養技術：病原體分離培養，特別是對于病原微生物和病毒的分離培養，是早期的病原體檢測的金標準。但該方法分離培養耗時長，無法實現短時間內迅速得到檢測結果，必須高度依賴檢測實驗室硬件及實驗操作人員條件，且不適用于目前未有成熟培養手段的病原微生物和病毒的檢測。(2)免疫學檢測：以基于抗原-抗體的免疫反應，識別病原相關蛋白，從蛋白水平對病原體進行檢測。該方法存在檢測靈敏度較低，且特異性受環境等影響較大，檢測的窗口期較長，無法滿足診療需求，僅適用于初篩而不能作為及時確診的依據，不能夠識別同一類病原的不同亞型等問題。

基于分子的診斷方法可以提高檢測抗性基因的速度和準確性，這對醫院和社區環境中的感染控制、預防、治療很有意義。目前分子診斷方法主要是聚合酶鏈反應(PCR)：包括普通PCR、等位基因特異性PCR、實時熒光定量PCR、PCR-Sanger測序技術、PCR-基因芯片技術等。PCR是從核酸水平對病原體進行檢測，整個實驗需要1～2小時完成。該方法的主要缺點在于進行PCR檢測時需要依賴PCR儀或昂貴的實時定量PCR儀，及其它多種配套設備，以及專門的PCR實驗室和專業操作人員。PCR檢測無法實現即時檢驗、床旁診斷和無特定實驗室檢測條件的場景應用，因此無法滿足基層、用戶終端、現場的檢驗需求。同時，PCR檢測可能存在假陽性和靈敏度不足等問題。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有STD病原檢測技術的缺陷和不足，研究得到一種基于CRISPR/Cas12a系統的STD病原核酸檢測位點，針對該位點利用CRISPR/Cas12a系統可實現STD病原的核酸檢測，特異性好、靈敏度高，假陽性低。

本發明的目的是提供一種基于CRISPR/Cas12a系統的STD病原核酸檢測位點及gRNA組合。

本發明另一目的是提供一種STD病原基因的CRISPR/Cas12a檢測系統。

本發明再一目的是提供一種基于CRISPR/Cas12a系統的STD病原核酸的檢測方法。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

本發明研究發現一種基于CRISPR/Cas12a系統的STD病原核酸檢測靶標位點，針對該位點可進行基于CRISPR/Cas12a系統的STD病原核酸檢測，檢測特異性好、靈敏度高。