[發(fā)明專利]一組EST-SSR引物信息及其在白及品系鑒別中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910364964.7
• 申請(qǐng)日: 2019-04-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110079628B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐德林;陳紅波;李林;鄧寬平;上官艷妮;陳榮輝;陳江霞;張迪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遵義醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 重慶強(qiáng)大凱創(chuàng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50217
• 代理人: 黃書凱

本方案公開(kāi)了分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，一組EST?SSR引物信息，共包括25對(duì)EST?SSR引物及其序列信息，通過(guò)該組標(biāo)記的應(yīng)用，不僅能夠?qū)⒉煌准捌废颠M(jìn)行準(zhǔn)確鑒別，同時(shí)還能對(duì)其遺傳多樣性信息進(jìn)行解讀，解釋地域差異導(dǎo)致的遺傳多樣性。基于本發(fā)明的EST?SSR引物信息和技術(shù)流程，可以實(shí)現(xiàn)其在白及品系鑒別、遺傳多樣性分析及分子標(biāo)記育種輔助選擇中的應(yīng)用，且更具可靠性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一組EST-SSR引物信息及其在白及品系鑒別中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

中藥材是我們國(guó)家的民族瑰寶，道地性是中藥材的固有屬性，然而隨著原生地的生態(tài)破壞和過(guò)度采挖，很多名貴中藥材都瀕臨滅絕，導(dǎo)致中藥材流通中假冒偽劣產(chǎn)品沖擊著市場(chǎng)。目前，中藥材真?zhèn)蔚蔫b別大多通過(guò)表觀形態(tài)和組織學(xué)進(jìn)行初步鑒別，但形態(tài)或組織學(xué)方法并不能將由于地理分布不同而產(chǎn)生的與道地藥材之間的區(qū)別進(jìn)行鑒別和區(qū)分，因此，以基因本身或其表達(dá)產(chǎn)物作為鑒別依據(jù)，即基于分子鑒別技術(shù)進(jìn)行種質(zhì)資源鑒定和遺傳多樣性分析的技術(shù)顯得十分必要，開(kāi)發(fā)可靠的分子標(biāo)記對(duì)于中藥材真?zhèn)渭捌鋬?yōu)勢(shì)種群的鑒別也迫在眉睫。

DNA分子標(biāo)記技術(shù)，亦稱分子鑒別技術(shù)，是一種基于遺傳物質(zhì)的標(biāo)記方式，具不受外界環(huán)境影響、檢驗(yàn)精度高及重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。隨著DNA分子標(biāo)記技術(shù)不斷運(yùn)用與革新，目前已涌現(xiàn)出大批以PCR擴(kuò)增技術(shù)為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù)，目前較常用的包括EST-SSR、SSR、ISSR、SNPs及標(biāo)記技術(shù)。且近來(lái)，分子標(biāo)記技術(shù)已廣泛并成功應(yīng)用于藥用植物包括資源鑒別、遺傳進(jìn)化、功能基因輔助定位與分離等方面。其中ISSR及EST-SSR均源于SSR標(biāo)記，不但具SSR標(biāo)記的共顯性、多等位基因、靈敏度高、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便及對(duì)模板DNA質(zhì)量要求不高等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)還各有特點(diǎn)。如ISSR由于標(biāo)記設(shè)計(jì)原理(錨定SSR序列)的不同而具有更高的物種間通用性，但同時(shí)也增大了特異標(biāo)記開(kāi)發(fā)的難度。而基于EST數(shù)據(jù)庫(kù)或cDNA文庫(kù)的EST-SSR標(biāo)記技術(shù)，除具傳統(tǒng)SSR標(biāo)記的特點(diǎn)外，更是一種能夠高效揭示基因容量的標(biāo)記辦法，能夠特異的展示出某一基因位點(diǎn)的表達(dá)情況，從而直接反映出功能基因的生物學(xué)信息。因此，EST-SSR標(biāo)記在種群遺傳多樣性研究、物種鑒別，尤其是功能基因相關(guān)研究等方面更具優(yōu)勢(shì)。

白及(Bletilla striata(Thunb.)Rchb.f.)是我國(guó)廣泛使用的傳統(tǒng)中藥材。主要以塊莖入藥，除具止血、生肌、抗菌抗腫瘤等屬性外，近年研究表明其具代血漿及作為中介媒體攜帶藥物等重要藥用價(jià)值，同時(shí)由于其花色艷麗也極具觀賞價(jià)值。全世界共六種，我國(guó)分布有四種，但近年來(lái)由于市場(chǎng)刺激導(dǎo)致野生資源遭受過(guò)度采挖而極度匱乏甚至瀕臨滅絕，同時(shí)市場(chǎng)魚(yú)龍混雜，假冒偽劣產(chǎn)品肆意橫行。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明意在提供一組EST-SSR引物信息，包括25對(duì)EST-SSR引物，分別為ZYBS-1、ZYBS-6、ZYBS-14、ZYBS-17、ZYBS-20、ZYBS-22、ZYBS-28、ZYBS-29、ZYBS-36、ZYBS-43、ZYBS-45、ZYBS-46、ZYBS-48、ZYBS-54、ZYBS-55、ZYBS-57、ZYBS-59、ZYBS-62、ZYBS-64、ZYBS-67、ZYBS-69、ZYBS-71、ZYBS-76、ZYBS-88、ZYBS-89；每對(duì)所述EST-SSR引物的引物序列如下表所示：

文中ZYBS為Zunyi Bletilla striata(遵義白及)縮寫，其后所跟數(shù)字為設(shè)計(jì)引物時(shí)為了區(qū)別不同引物而給出的數(shù)字標(biāo)識(shí)，不具有涉及方案實(shí)質(zhì)性內(nèi)容的含義。

所有堿基序列均有一個(gè)讀取起始端和終末端，分別是方案中所標(biāo)出的5'-3'，即5’端和3’端。

本發(fā)明提供的一組EST-SSR引物信息可應(yīng)用于白及種質(zhì)資源的鑒定、白及遺傳多樣性分析和白及分子輔助育種。

本發(fā)明一組EST-SSR引物信息在白及品系鑒別中的應(yīng)用，包括如下步驟：

步驟1)：利用CTAB法提取白及供試材料的基因組DNA，保存?zhèn)溆茫?/p>