[發明專利]凈化環匹阿尼酸免疫吸附劑及免疫親和柱

有效

• 申請號: 201910364891.1
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110133251B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 李培武;李慧;姜俊;張兆威;張文
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;G01N33/531;G01N30/02;G01N30/08;B01J20/286;B01D15/22;B01D15/08
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.凈化環匹阿尼酸免疫吸附劑，其特征在于：所述的免疫吸附劑包括固相載體和與該固相載體偶聯的抗環匹阿尼酸單克隆抗體，所述抗環匹阿尼酸單克隆抗體由保藏編號為CCTCC NO.C201871的雜交瘤細胞株YTT-2分泌產生，所述抗環匹阿尼酸單克隆抗體的重鏈可變區序列如SEQ ID NO:3所示，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根據權利要求1所述的凈化環匹阿尼酸免疫吸附劑，其特征在于：所述固相載體為瓊脂糖凝膠。

3.裝載有權利要求1所述的凈化環匹阿尼酸免疫吸附劑的凈化環匹阿尼酸免疫親和柱。

4.根據權利要求3所述的凈化環匹阿尼酸免疫親和柱的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)固相載體基質處理

將CNBr活化的瓊脂糖凝膠基質粉末在pH2-3的條件下用HCl洗滌除雜；

CNBr活化的瓊脂糖凝膠是以凍干形式提供；

b)配體偶聯

使用偶聯緩沖液溶解待偶聯的抗環匹阿尼酸單克隆抗體，獲得抗體溶液，迅速將步驟a)處理后的瓊脂糖凝膠基質轉移到所述抗體溶液中，進行偶聯；

c)配體封閉

封閉所有殘留的活性基團；

d)除去偶聯后未偶聯上的多余的配體；

e)裝柱。

5.根據權利要求4所述的凈化環匹阿尼酸免疫親和柱的制備方法，其特征在于，所述步驟a)中洗滌用HCl濃度為1mmol/L，洗滌時間為15min；步驟b)中的偶聯緩沖液為0.2mol/LNaHCO₃，pH8.3。

6.根據權利要求4所述的凈化環匹阿尼酸免疫親和柱的制備方法，其特征在于：步驟b)中抗體溶液濃度為10-15mg/mL；偶聯條件為：室溫條件下充分混勻2-4h。

7.根據權利要求4所述的凈化環匹阿尼酸免疫親和柱的制備方法，其特征在于：步驟c)的配體封閉過程為：轉移經步驟b)處理的瓊脂糖凝膠基質至0.1mol/L Tris-HCl緩沖液中，室溫條件下靜置2-4h。

8.根據權利要求4所述的凈化環匹阿尼酸免疫親和柱的制備方法，其特征在于：步驟d)為：依次用pH值為4和pH值為8的緩沖液對經步驟c)處理后的瓊脂糖凝膠基質進行洗滌，至少洗滌3個循環；pH值為4和pH值為8的緩沖液分別選自0.1mol/L醋酸/醋酸鈉緩沖液和0.1mol/L Tris-HCl緩沖液。

9.根據權利要求4所述的凈化環匹阿尼酸免疫親和柱的制備方法，其特征在于：經步驟d)處理后，用5倍所述瓊脂糖凝膠體積的0.01％NaN₃-PBS洗滌，并使用0.01％NaN₃-PBS保存，然后裝柱。

10.基于權利要求3所述的凈化環匹阿尼酸免疫親和柱檢測環匹阿尼酸含量的方法，其特征在于：將含有環匹阿尼酸的樣品通過凈化環匹阿尼酸免疫親和柱，含有環匹阿尼酸的樣品通過免疫親和柱時免疫吸附劑會特異性地吸附環匹阿尼酸，其他的雜質則流出免疫親和柱，然后用色譜級甲醇洗脫親和柱，收集洗脫液即凈化濃縮后的樣品供高效液相色譜-質譜聯用儀檢測，分析樣品中環匹阿尼酸含量。