[發(fā)明專利]一種快速檢測生物組織切片COSMC基因突變試劑盒

在審

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• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110161241A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁曉昆
• 申請（專利權(quán)）人: 丁曉昆
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/58
• 代理公司: 北京久維律師事務(wù)所 11582
• 代理人: 邢江峰

本發(fā)明及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測生物組織切片COSMC基因突變試劑盒。該試劑盒內(nèi)含：1)熒光(紅色)凝集素HAA濃縮液1管和2)熒光(綠色)凝集素PNA濃縮液1管、3)細胞核熒光染色劑DAPI1管。4)凝集素稀釋液1瓶、5)TBS緩沖液1瓶、6)抗原修復(fù)液1瓶、7)封片劑1瓶、8)陽性對照病理切片1塑料盒(五張)、9)說明書和10)質(zhì)檢報告各一份。此外，試劑盒的盒體和盒內(nèi)帶下凹位的試劑架均為硬紙材料。本試劑盒通過熒光免疫凝集素直標雙染色法，同時檢測組織切片中CD175抗原和CD176抗原的表達情況，HAA陽性同時PNA陰性者，即表明COSMC基因突變和T?合酶活性喪失。該產(chǎn)品能迅速確定生物組織切片COSMC基因突變和T?合酶失活情況，對于研究T?合酶生物學(xué)意義以及與人類疾病的關(guān)系都有重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測生物組織切片COSMC 基因突變試劑盒，COSMC是T-合酶(T-synthase)的分子伴侶，T-合酶又叫半乳糖基轉(zhuǎn)移酶(core1β3-galactosyltransferase)，COSMC基因突變意味著T-合酶活性的喪失，誘發(fā)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。

背景技術(shù)

T-合酶是合成核心1(core1)結(jié)構(gòu)的唯一糖基轉(zhuǎn)移酶，在分子伴侶COSMC 的協(xié)助下，將半乳糖(Galactose)添加到CD175抗原(GalNAcα1-Ser/Thr) 糖鏈上形成CD176抗原。用示意圖可以簡單表述為：CD175+UDP-Galactose_{T-合酶(COSMC)}CD176抗原。在人體和其他脊椎動物中，T-合酶失活將導(dǎo)致機體細胞內(nèi)堆積大量的CD175抗原，但是僅有腫瘤糖蛋白CD175抗原的過量表達，并不代表COSMC基因突變及T-合酶活性喪失，相反有時CD175表達增多時，往往伴有T-合酶活性異常升高。當只有CD175抗原過量表達而沒有CD176抗原同時表達時，才能確認COSMC基因突變和T-合酶喪失活性。T-合酶的活性正常與否與癌癥發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。目前，已有一些檢測新鮮組織細胞裂解液T-合酶活性的方法，原文的標題是Anovel fluorescent assayfor T-synthase activity，文獻發(fā)表在2010年的《Glycobiology》volume21(3) p352-362上，該方法只能用于新鮮的組織細胞樣品，檢測方法比較繁瑣，且不能用于病理組織切片的快速檢測。

發(fā)明內(nèi)容:

有鑒于此，本發(fā)明研制一種快速檢測生物組織切片COSMC基因突變試劑盒。該試劑盒包括：1)1管標記熒光的抗CD175抗原的凝聚素HAA(蝸牛凝集素，Helixaspersa)。2)1管標記熒光的能與CD176抗原特異性結(jié)合的凝聚素PNA(花生凝集素，Peanut lectin)。3)1管細胞核熒光染色劑DAPI。 4)1瓶熒光凝聚素稀釋液。5)1瓶TBS緩沖液。6)1瓶抗原修復(fù)液。7)1瓶封片劑。8)1塑料盒(五張)陽性對照病理切片、9)一份說明書和10) 一份質(zhì)檢報告。本試劑盒用熒光凝集素雙染色法，同時檢測病理組織切片 CD175和CD176抗原，HAA陽性同時PNA陰性的組織細胞即表明COSMC 基因突變和T-合酶失活(見下圖)；而PNA陽性和HAA與PNA雙陽性者則表明T-合酶活性依然存在，甚至T-合酶活性增高。

本發(fā)明的有益效果如下：本發(fā)明通過熒光凝聚素雙染色法的檢測方法，快速判定病變組織COSMC基因突變的存在與否，目前已證實在消化道組織中，發(fā)生COSMC基因突變的病變部位，其癌變率明顯增高，例如結(jié)腸息肉伴有COSMC基因突變則癌變風(fēng)險增大。因此，結(jié)腸鏡檢查時如發(fā)現(xiàn)息肉應(yīng)作COSMC基因突變的快速檢測，有利于對病人采取及時有效的治療措施。

附圖說明