[發明專利]一種基于UPLC-QTOF-MS檢測伸筋草生物堿成分的方法

有效

• 申請號: 201910361804.7
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN109917066B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 張云天;翟燕娟;張宇靜;張玉;何雪霞
• 申請（專利權）人: 江陰天江藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇

本發明提供了一種基于UPLC?QTOF?MS檢測伸筋草中生物堿成分的方法，包括以下步驟：(1)將伸筋草制成粉末，精密稱定，然后與溶劑混合，稱定重量；(2)將步驟(1)所得的伸筋草超聲破碎，然后將超聲過的伸筋草溶液搖勻，離心，過濾，取續濾液，即得到待測樣品；(3)用超高效液相色譜分離步驟(2)中的待測樣品，得到生物堿待測樣品，將所得的生物堿待測樣品用質譜檢測，得生物堿成分物質峰，用分析軟件對所述物質峰進行定性分析。本發明的方法首次采用UPLC?QTOF?MS技術對伸筋草中生物堿成分進行檢測并定性，所述方法具有高效、快速、準確的特點。采用本發明的方法共鑒定出34種生物堿成分，為進一步研究伸筋草藥效物質基礎及全面質量控制提供了依據。

技術領域

本發明涉及一種基于UPLC-QTOF-MS檢測化學成分的方法，具體涉及一種基于UPLC-QTOF-MS檢測伸筋草中生物堿成分的方法。

背景技術

伸筋草Lycopodii Herba為石松科植物石松Lycopodium japonicum Thunb.的干燥全草，其味微苦、溫、辛，歸于肝、腎、脾經，具有祛風除濕、舒筋活絡、止咳、解毒、消腫等功效。主要含有生物堿和三萜類成分，伴有少量的黃酮及其他類型的化合物，臨床上多用于治療關節屈伸不利、風寒溫痹、關節腫痛、筋脈拘急、跌打損傷。現代藥理研究表明伸筋草具有抗炎、鎮痛、免疫調節、清除自由基、治療矽肺等作用。其中生物堿類化合物還對心血管系統、神經肌肉、膽堿酯酶抑制等有一定作用(滕翠翠,何永志,馮金磊,等.伸筋草的化學成分研究[J].中草藥,2010,41(12):1960-1963.)。

作為一種重要并且普遍應用的中藥，有長期的臨床應用實踐，得進一步的研究與開發。前期學者對伸筋草進行了大量的研究，但其化學成分研究多關注于其三萜類成分。中國藥典2015年版一部伸筋草藥材項下，僅采用對照藥材進行TLC鑒別，沒有含量檢測項。且由于同科同屬植物與其形狀相似，難以辨別，并且化學組分復雜，無法全面的評價伸筋草藥材的內在質量。現有文獻史利利(史利利,何永志.伸筋草石松三萜化學成分[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(9):90-92.)利用正相色譜技術結合薄層色譜法對伸筋草正丁醇層提取物進行分離純化，得到的僅是伸筋草中三萜類化學成分，主要的生物堿類成分尚未研究；尤獻民(尤獻民,閆玉軍,鄒桂欣,等.伸筋草藥材質量標準研究[J].遼寧中醫藥大學學報,2012(12):15-17.)等人對伸筋草藥材黃酮類、三萜類及生物堿類特征成分進行TLC鑒別研究，但其僅對α-玉柏堿進行了含量測定，對其他生物堿類成分并未進行詳細分析。生物堿作為伸筋草主要化學成分之一，目前研究的尚不全面，其中的藥效物質基礎的研究還不夠深入。因此，對伸筋草的藥效物質基礎和質量控制開展進一步的研究顯得尤為重要。

近年來，UPLC-QTOF-MS在天然產物化學成分的研究中已得到廣泛應用，并且被逐漸應用于中藥藥效基礎、藥物質量控制，已經成為藥理學研究中高效、可靠的分析方法(許玲玲,安睿,王新宏.液質聯用技術在中藥分析中的應用[J].中成藥,2006,28(2):239-246.)。例如胥愛麗等(胥愛麗,董玉娟,陳昭,等.UPLC/Q-TOF MS法對何首烏配方顆粒化學成分的快速分析[J].中藥材,2015,38(6).)采用了超高效液相色譜-四極桿-飛行時間高分辨質譜(UPLC/Q-TOF MS)聯用技術，鑒定出何首烏配方顆粒中的5個化合物，為何首烏配方顆粒的質量控制提供參考；現有技術中，還沒有針對UPLC-QTOF-MS技術對伸筋草中生物堿類成分的檢測方法的報道。

發明內容

發明要解決的問題

基于現有技術中的上述問題，本發明的目的在于提供一種基于UPLC-QTOF-MS技術對伸筋草中生物堿成分的檢測方法，使所述方法具有快速、準確、批量檢測的特點。且將新的化學成分的研究和藥效學實驗相結合，進行中藥譜效學研究，實現伸筋草藥材質量與藥效的統一，為伸筋草藥材的全面質量控制提供依據。

用于解決問題的方案