[發明專利]雜交瘤細胞株YTT-2及其產生的抗環匹阿尼酸單克隆抗體

有效

• 申請號: 201910361592.2
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110106152B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 張奇;李培武;唐曉倩;李慧;張文
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/14;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

本發明涉及雜交瘤細胞株YTT?2及其產生的抗環匹阿尼酸單克隆抗體。本發明提供的雜交瘤細胞株YTT?2，保藏編號CCTCC NO:C201871，可用于制備高效價抗環匹阿尼酸單克隆抗體，抗環匹阿尼酸腹水抗體間接非競爭酶聯免疫吸附分析法(ELISA)測得效價可達1.2×10⁵。本發明提供的抗環匹阿尼酸單克隆抗體靈敏度高、特異性好，對環匹阿尼酸的50％抑制濃度IC₅₀為0.84ng/mL，對黃曲霉毒素和雜色曲霉毒素的交叉反應率均小于0.1％，可應用于環匹阿尼酸的殘留檢測。

技術領域

本發明涉及雜交瘤細胞株YTT-2及其產生的抗環匹阿尼酸單克隆抗體。

背景技術

環匹阿尼酸(CPA)是青霉菌屬和曲霉菌屬真菌產生次級代謝產物，穩定性好，一般的儲存條件和加工程序不能破壞環匹阿尼酸，其毒性主要表現為胃腸潰瘍、脾臟萎縮、腎病、肝臟和心肌壞死。同時，環匹阿尼酸是肌質網中鈣依賴性ATP酶的特異性抑制劑，導致Ca²⁺濃度升高，致使肌肉收縮增加，造成細胞膜通透性增加，神經元骨架破壞，神經細絲分解，神經微觀解聚，導致神經元壞死。環匹阿尼酸可污染花生、玉米、棉籽、飼料等農產品，并能通過飼料轉移到牛奶和雞蛋中。環匹阿尼酸可與黃曲霉毒素同時產生，通常適合黃曲霉毒素產生的條件，也適合環匹阿尼酸產生，因此，環匹阿尼酸造成的農產品、食品安全問題會被同時產生的黃曲霉毒素掩蓋，目前研究認為“火雞X病”、“Kodua中毒”是由環匹阿尼酸與黃曲霉毒素共同引起。一些黃曲霉毒素未檢出的農產品中可能含有高濃度的環匹阿尼酸，引起人畜的健康危害。因此，需要建立農產品中CPA的快速、可靠的免疫學檢測技術。因此探究及農產品、食品中環匹阿尼酸的分析方法具有重要的意義。

目前環匹阿尼酸分析檢測方法主要包括薄層色譜法、高效液相色譜法、液質聯用等。薄層色譜法由于前處理操作過程中有機溶劑以及毒素會對操作人員產生毒害作用，且測定結果靈敏度和準確度不高。高效液相色譜法、液質聯用等儀器分析法是常用的定性定量分析法，這些方法雖然靈敏度高、穩定性強，但需要大量時間進行復雜的前處理，而且需要嚴格的實驗室環境，昂貴的儀器設備以及專業的操作人員，不能滿足現場污染檢測。免疫分析是基于抗原與抗體的特異性結合反應，通過免疫標記技術，將酶、放射性元素、膠體金等標記物與抗原或抗體結合，用于定性定量檢測待檢物質，其中抗體是核心試劑，其質量很大程度上決定了免疫分析的靈敏度與特異性，而只有高質量的抗體才能滿足免疫分析。目前，國內外有關CPA的檢測方法主要為儀器檢測，鮮有針環匹阿尼酸免疫學檢測技術的報道。因此，抗環匹阿尼酸單克隆抗體的研究獲得可為環匹阿尼酸的快速檢測開辟新思路，對實現環匹阿尼酸免疫定量檢測具有重要意義。

發明內容

本發明所要解決的問題是提供雜交瘤細胞株YTT-2及其產生的抗環匹阿尼酸單克隆抗體。

本發明提供了雜交瘤細胞株YTT-2，該細胞株已于2018年3月23日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCCNO.C201871。其具有序列表中SEQ ID NO:1所示的抗環匹阿尼酸單克隆抗體重鏈可變區編碼基因序列和序列表中SEQ ID NO:2所示的抗環匹阿尼酸單克隆抗體輕鏈可變區編碼基因序列。

抗環匹阿尼酸單克隆抗體，它由保藏編號為CCTCC NO.C201871的雜交瘤細胞株YTT-2分泌產生。其重鏈可變區具有序列表中SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；輕鏈可變區具有序列表中SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。該抗環匹阿尼酸單克隆抗體可以特異性識別環匹阿尼酸，對環匹阿尼酸的50％抑制濃度IC50為0.84ng/mL。

抗環匹阿尼酸單克隆抗體在環匹阿尼酸含量測定中的應用。