[發(fā)明專利]一種肝癌診斷標(biāo)志物BRIX1及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910361288.8
• 申請(qǐng)日: 2019-04-30
• 公開（公告）號(hào): CN110129277B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程張軍;雷正清;唐波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 程張軍;南京諾唯贊醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/30;G01N33/574
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 杜靜;徐冬濤

本發(fā)明公開一種肝癌診斷標(biāo)志物BRIX1及其應(yīng)用，本發(fā)明提供所述標(biāo)志物BRIX1在制備用于診斷或輔助診斷肝癌產(chǎn)品中的應(yīng)用，結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)和生物信息學(xué)等知識(shí)和手段，對(duì)RNA結(jié)合蛋白BRIX1進(jìn)行更深入的分子改良，篩選性能優(yōu)良的突變體BRIX1?1，低成本地制備優(yōu)質(zhì)高效的新型BRIX1抗體，并建立方法學(xué)檢測(cè)血液中的BRIX1，具有非常重要的理論價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程和蛋白工程領(lǐng)域，具體是一種肝癌診斷標(biāo)志物BRIX1及其應(yīng)用。

技術(shù)背景

肝癌是世界范圍內(nèi)的惡性腫瘤之一，死亡率極高，亞洲屬于肝癌的高發(fā)地區(qū)。中國(guó)是肝癌大國(guó)，肝癌患者已占全球的50％左右，其中新增癌癥病例與肝癌的死亡人數(shù)均高居世界第一位。在我國(guó)，肝癌僅次于肺癌，是死亡率第二高的癌癥疾病。肝癌大致可以分為原發(fā)性肝癌和轉(zhuǎn)移性肝癌。在肝癌患者中，多數(shù)是感染了乙肝病毒或者丙肝病毒并逐漸由急性病毒感染轉(zhuǎn)變?yōu)槁圆《靖窝锥罱K進(jìn)展為肝癌。據(jù)統(tǒng)計(jì)，乙肝患者發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)比正常人高出100～150倍，我國(guó)慢性乙肝患者人數(shù)已超過(guò)2000萬(wàn)人，肝癌患者不斷增多。除此以外，攝入被黃曲霉毒素污染的食物、過(guò)量飲酒也都是誘發(fā)肝癌的重要因素。

針對(duì)肝癌的篩查和診斷工作已經(jīng)刻不容緩。目前，肝癌的主要治療方法還是以放療、化療以及手術(shù)切除為主，肝癌早期進(jìn)行切除手術(shù)存活率較高，但在IV期時(shí)則不超過(guò)38％。也就是說(shuō)肝癌發(fā)現(xiàn)的越早，對(duì)其治療狀況以及術(shù)后預(yù)后都有極大的改善。CT/MRI是用于肝癌檢測(cè)最為直觀的方法，但是不適用于高?；颊摺＜滋サ鞍?AFP)是用于早期肝癌檢測(cè)的已知生物標(biāo)志物，一般在含量不斷上升時(shí)有確定的意義，但是特異性和早期檢出率較差。AFP與肝癌以及多種腫瘤的發(fā)生均表現(xiàn)出較高的濃度，在某些肝炎患者、肝硬化患者等的體內(nèi)也會(huì)出現(xiàn)AFP升高的情況，檢測(cè)過(guò)程中有假陽(yáng)性的存在。在18％-20％的原發(fā)性肝癌患者中血清AFP正常，因此AFP陰性也不能用于排除原發(fā)性肝癌。發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用具有高特異性和高敏感度的肝癌早期診斷與預(yù)后評(píng)估標(biāo)志物將有效改善肝癌現(xiàn)狀。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的之一在于提供一種新的肝癌診斷標(biāo)志物BRIX1及其在肝癌診斷中的應(yīng)用。

本發(fā)明目的之二在于提供一種新的抗原BRIX1-1。

本發(fā)明目的之三在于提供一種用于診斷標(biāo)志物BRIX1的抗體。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案具體實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明提供一種新的肝癌診斷標(biāo)志物BRIX1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)BRIX1在肝癌組織中高表達(dá)，顯著高于癌旁組織?；颊咝g(shù)后總生存率和復(fù)發(fā)率結(jié)果顯示BRIX1高表達(dá)者預(yù)后差。在BRIX1對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的分析中發(fā)現(xiàn)BRIX1蛋白與肝癌細(xì)胞的凋亡顯著相關(guān)，敲除BRIX1使肝癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力下降；BRIX1的表達(dá)基因主要與癌癥、器官損傷和消化道疾病有關(guān)，提示BRIX1蛋白在肝癌的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，可利用BRIX1蛋白的特異性單克隆抗體進(jìn)行免疫組化診斷。

本發(fā)明還提供擴(kuò)增所述標(biāo)志物BRIX1的引物：

引物P1:

引物P2:

本發(fā)明還提供所述標(biāo)志物BRIX1在制備用于診斷或輔助診斷肝癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的標(biāo)志物BRIX1存在于肝癌患者的血液中，即BRIX1可以用作診斷肝癌的血清學(xué)標(biāo)志物。

在一種具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種基于ELISA方法建立的BRIX1測(cè)量系統(tǒng)以檢測(cè)血液中的BRIX1。

本發(fā)明還提供一種提高標(biāo)志物BRIX1的突變體BRIX1-1，序列如SEQ ID NO.1所示，或者與SEQ ID NO.1具有98％同一性的序列，優(yōu)選的，如SEQ ID NO.1所示或者與SEQ IDNO.1具有99％同一性的序列。