[發明專利]一種磷脂檢測方法及應用

在審

• 申請號: 201910361172.4
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110007032A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 常明;趙品貞;陶冠軍;劉睿杰;張濤;王興國;金青哲
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 王曉東

本發明公開了一種磷脂檢測方法及應用，其中一種磷脂檢測方法，其為用乙腈和乙酸銨洗脫；一種磷脂檢測洗脫液，其包括，乙腈、乙酸銨，其中，按體積百分數計，所述乙腈為50％～95％，所述乙酸銨為5％～50％；一種磷脂檢測方法的應用，其為用于檢測磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、甘油磷脂酸、鞘磷脂、溶血磷脂酰膽堿的檢測。本發明提供的分析方法操作簡便，分析的磷脂種類多，峰型好，保留時間短，方便快捷，可靠實用。

技術領域

本發明屬于磷脂檢測技術領域，具體涉及一種磷脂檢測方法及應用。

背景技術

磷脂是生物膜的主要成分。根據其極性酰基頭基，磷脂分為六類：磷脂酰膽堿(Phosphatidyl cholines,PC)、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidyl ethanolamines,PE)、磷脂酰絲氨酸(Phosphatidyl serines,PS)、磷脂酰甘油(phosphatidyl glycerol，PG)、甘油磷脂酸(phosphatidic acid,PA)和鞘磷脂(sphingolipid，SM),磷脂的Sn-2酰基鏈發生降解可以變成溶血磷脂，如溶血磷脂酰膽堿(lyso-phosphatidylcholine，LPC)。磷脂雙分子層是細胞膜的基礎結構,人們對磷脂的生命功能的認識始于生物膜的基本組成部分,幾乎所有細胞在細胞膜和胞內膜水平所完成的功能都是直接或間接地受到磷脂定位及結構變化的影響,之后磷脂的重要功能被不斷發掘出來。生物體內的膜的組成并不是穩定不變的,外界的擾動及生物體的內部變化都可能引起膜上磷脂組成的變化。對膜上磷脂變化的研究有助于側面理解外界環境導致的細胞生長代謝機制的變化。秀麗隱桿線蟲是一種國際公認的針對磷脂組學的研究型模式生物，膜脂質由結構脂質(膜脂如PL)和儲存脂質(主要是中性脂質)組成，磷脂組成多樣。極性頭部組，甘油骨架，磷脂類或立體特異性的變化將強烈影響機體的生物學活性。

因此快速定量檢測磷脂具有一定的必要性和實用性。關于磷脂的檢測，國內外一般采用正相或反相液相色譜的方法，正相色譜多采用硅膠色譜柱，一般只對磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺響應較強，對其他種類的磷脂洗脫能力較弱，其次檢測需要的平衡時間過長，不適用于快速分析復雜的生物膜磷脂。而反相色譜是根據磷脂化合物?；滈L度的不同導致的疏水性差異進行分離，故各大類磷脂很容易在同一時間段內被洗脫，從而導致峰型重疊。此外在檢測器上也有報道質譜法檢測磷脂，然而其價格高昂，維護成本高，磷脂分子電離出現抑制，影響峰型。相比而言，高效液相色譜蒸發光檢測法操作簡單，準確性高，成本低，已有研究對相關方法進行了探索，但都存在一些問題有待改進，如流動相大多采用正己烷和異丙醇，對色譜柱、液相泵、分流環等硬件損害大，會使其壽命縮短，且已報道的檢測方法只能檢測磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺等有限數量磷脂，或是平衡時間長、峰型拖尾、難分離導致定量不準，隨著磷脂分子種類的增加，所需分離時間增加，選擇合適的洗脫梯度和色譜參數，對兼具分離效果與分析效率至關重要。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述的技術缺陷，提出了本發明。

因此，作為本發明其中一個方面，本發明克服現有技術中存在的不足，提供一種磷脂檢測方法及應用。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種磷脂檢測方法，其特征在于：用乙腈和乙酸銨洗脫。

作為本發明所述磷脂檢測方法的優選方案，其中，所述洗脫為梯度洗脫。

作為本發明所述磷脂檢測方法的優選方案，其中，所述梯度洗脫，其為0～2min時用第一體積比的所述乙腈和所述乙酸銨淋洗，2～20min時用第二體積比的所述乙腈和所述乙酸銨淋洗，再使用所述第一體積比的所述乙腈和所述乙酸銨淋洗；