[發明專利]一種準確檢測天麻多糖回轉半徑及分子量分布的方法

在審

• 申請號: 201910359907.X
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN109991067A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 竇海洋;戴珊珊;竇雨薇;申世剛
• 申請（專利權）人: 河北大學
• 主分類號: G01N1/38
• 分類號: G01N1/38;G01N21/41;G01N21/51
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 黃慧慧

本發明提供了一種準確檢測天麻多糖回轉半徑及分子量分布的方法，其是采用非對稱場流分離技術聯用多角度激光光散射檢測器和示差折光檢測器分離表征天麻多糖并提供樣品的回轉半徑和分子量分布等信息，在接近原位條件下對樣品進行分離表征，發現并克服了在采用非對稱場流分離技術檢測天麻多糖過程中所存在的空間位阻的影響，得到更為準確的回轉半徑及其分子量分布，且結果重現性好，減少了分析時間，提高了檢測效率，具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種多糖的檢測方法，具體地說是涉及一種準確檢測天麻多糖回轉半徑及分子量分布的方法。

背景技術

天麻多糖是天麻重要成分之一，具有免疫、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤等生物活性。研究表明，天麻多糖一般具有超高分子量和較寬的粒徑分布，多糖的生物活性與其回轉半徑、分子量分布等緊密相關。因此，采用一種快捷的檢測天麻多糖回轉半徑和分子量分布的分析方法對天麻多糖的活性研究是必要的。

目前，表征多糖分子量分布的常用方法為凝膠滲透色譜法（Gel permeationchromatography，GPC），其基于體積排阻的分離機理，通過具有分子篩性質的固定相對樣品進行分離。GPC一般適用于分子量范圍小于10⁷ g/mol的樣品，對于超高分子量多糖樣品（分子量大于10⁷ g/mol），GPC需對樣品進行前處理，分離過程中存在的剪切力破壞多糖原有結構，導致無法準確測得天麻多糖的分子量分布。因此，發展一種適用于分離表征多分散性超高分子量的多糖樣品的分析方法十分重要。

發明內容

本發明的目的就是提供一種準確檢測天麻多糖回轉半徑及分子量分布的方法，以解決現有天麻多糖檢測方法破壞其原有結構，無法準確測得天麻多糖回轉半徑和分子量分布的問題。

本發明的目的是這樣實現的：

一種準確檢測天麻多糖回轉半徑及分子量分布的方法，包括如下步驟：

（a）制備天麻多糖水溶液；

（b）采用非對稱場流分離技術聯用多角度激光光散射檢測器和示差折光檢測器（AF4-MALS-dRI）來分離表征天麻多糖水溶液中的天麻多糖回轉半徑和分子量分布，其中，洗脫流速采用指數衰減交叉流流速且初始流速為0.8~1 mL/min，半衰期為1.5~2.5 min。

步驟（a）中，所述天麻多糖水溶液的濃度為1~2 mg/mL；優選地，所述天麻多糖水溶液的濃度為1 mg/mL。

采用下述方法制備天麻多糖水溶液：將特定量的天麻多糖與純水混合，制成所需濃度的天麻多糖水溶液；優選地，將其置于50℃水浴中，以200 rpm連續攪拌2 h，自然冷卻至室溫，取1 mL放入1.5 mL EP管內備用。

步驟（b）中，分離表征時所用載液包括NaNO₃ 和NaN₃的混合水溶液；具體地，所述載液為濃度為10 mM 的NaNO₃水溶液和3 mM NaN₃水溶液的混合液，其pH為7.00。

非對稱場流分離技術與多角度激光光散射檢測器和示差折光檢測器（AF4-MALS-dRI）聯用時，所用墊片高度為490 μm。

非對稱場流分離技術與多角度激光光散射檢測器和示差折光檢測器（AF4-MALS-dRI）聯用時，檢測器流速為1 mL/min。

優選地，指數衰減交叉流流速由0.8~1 mL/min降至0.05 mL/min，；更優選地，所述初始流速為0.9 mL/min，即指數衰減交叉流流速為由0.9 mL/min降至0.05 mL/min。

優選地，所述半衰期為2 min；更優選地，所述交叉流流速檢測程序如下表1所示：

表1 天麻多糖場流分離洗脫程序