[發明專利]一種改變鈉鈣離子比洗脫蛋白質的分子印跡電極的制備方法

在審

• 申請號: 201910358077.9
• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN110044995A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 趙孔銀;齊夢;林澤;莫琛;童宇鑫;李聰;鮑奇文;岳瑞瑞;王會才
• 申請（專利權）人: 天津工業大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/30;G01N27/327
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1.一種改變鈉鈣離子比洗脫蛋白質的分子印跡電極的制備方法，其特征是包括以下步驟：

a)配制質量百分比濃度為0.01％-2％的3-氨基丙基三乙氧基硅烷的乙醇溶液，將絲網印刷技術制備的裸碳電極用無水乙醇清洗干凈，然后浸泡到3-氨基丙基三乙氧基硅烷的乙醇溶液中1-24小時，在裸碳電極表面引入氨基；

b)配制蛋白質質量百分比濃度為0.01％-5％，海藻酸鈉質量百分比濃度為1％-5％，硅酸鈉質量百分比濃度為0.1％-2％的混合物水溶液，靜置消泡后放置于無菌容器中備用；

c)配制氯化鈣質量百分比濃度為0.1％-10％的氯化鈣水溶液；

d)采用絲網印刷工藝，將步驟b)得到的混合物水溶液均勻地印刷到步驟a)得到的表面引入氨基的裸碳電極上，利用氨基與海藻酸鈉上的羧基之間的相互作用使海藻酸鈉分子結合在裸碳電極表面；控制混合物水溶液的印刷厚度為20-1000微米；立即將裸碳電極浸泡到步驟c)得到的氯化鈣水溶液1-24小時，得到負載蛋白質的海藻酸鈣基水凝膠修飾的裸碳電極；

e)配制含1.0mmol/L鐵氰化鉀/亞鐵氰化鉀的氯化鈉/氯化鈣的混合水溶液作為洗脫液；

f)以步驟d)得到的負載蛋白質的海藻酸鈣基水凝膠修飾的裸碳電極作為工作電極，將該工作電極浸泡在步驟e)得到的洗脫液中進行循環伏安掃描，改變洗脫液中鈉離子和鈣離子的比例調控水凝膠溶脹，調節電勢控制蛋白質擴散速率，從而在5-60分鐘內快速充分無損地洗脫蛋白質，得到一種改變鈉鈣離子比洗脫蛋白質的分子印跡電極；

g)以步驟f)得到的一種改變鈉鈣離子比洗脫蛋白質的分子印跡電極作為工作電極，銀電極作為參比電極，鉑片作為輔助電極，采用循環伏安法檢測模板蛋白質的洗脫程度；由于分子印跡水凝膠修飾電極上的分子印跡水凝膠可做到很薄，且控制鈉離子和鈣離子的比例使海藻酸鈣基水凝膠快速溶脹，再加上電場的作用，因此蛋白質洗脫快，檢測時間短，靈敏度高；通過加入硅酸鈉的含量控制海藻酸鈣基水凝膠的溶脹，硅酸鈉含量越大，海藻酸鈣基水凝膠的溶脹越小；通過控制鈉鈣離子比和硅酸鈉的含量調控海藻酸鈣基水凝膠的溶脹，進而控制海藻酸鈣基水凝膠中蛋白質的擴散；

h)由于在制備過程中沒有引入有毒有害試劑，沒有聚合反應熱引起蛋白質構象的變化，洗脫蛋白質的過程也比較溫和，因此得到的蛋白質分子印跡水凝膠電極生物相容性好，識別選擇性高，在蛋白質快速分析檢測領域具有良好的應用前景。

2.如權利要求1所述一種改變鈉鈣離子比洗脫蛋白質的分子印跡電極的制備方法，其特征是所述的蛋白質為牛血清白蛋白、牛血紅蛋白、卵清蛋白、粘連蛋白、轉化生長因子中的任意一種。

3.如權利要求1所述一種改變鈉鈣離子比洗脫蛋白質的分子印跡電極的制備方法，其特征是所述的氯化鈉/氯化鈣的混合水溶液中鈉離子和鈣離子的摩爾比為50∶1-1∶10，總溶液中鈉離子的質量百分比為0.1％-2％。